工程化haPD-1外泌体的制备及功能初步鉴定

摘要

为阻断免疫细胞上PD-1与肿瘤细胞上PD-L1结合，阻止免疫逃逸，以利免疫细胞识别并杀伤肿瘤细胞，目前已开发多种单抗药物，但均不可避免地出现副作用或治疗效率不高等问题。为解决这些问题，用慢病毒载体将高亲和PD-1片段(haPD-1)与跨膜蛋白LAMP2B信号肽序列融合，转入HEK293T细胞，使其在膜上分泌表达haPD-1的外泌体，这些外泌体可竞争性地结合肿瘤细胞表面PD-L1,同时拥有自身免疫原性低、可长时间稳定存在的优点。结果表明：haPD-1基因被成功转染至HEK293T细胞；通过细胞上清分离的外泌体经检测符合外泌体特征，并与PD-L1具有良好的亲和力，在体外可被PD-L1阳性HepG2细胞摄取，并可提高NK细胞对PD-L1阳性HepG2肝癌细胞的杀伤力。综上，表达haPD-1的工程化外泌体可能具有类似于PD-L1单抗的功能，可与肿瘤细胞表面的PD-L1结合，阻止肿瘤细胞的免疫逃逸，可应用于肿瘤的免疫治疗。

关键词

外泌体 / PD-1 / PD-L1 / haPD-1 / 免疫逃逸 / 抗肿瘤