牛单核细胞趋化蛋白-1单克隆抗体的制备及应用

摘要

为制备牛单核细胞趋化蛋白-1 （BoMCP-1）的单克隆抗体，构建表达BoMCP-1基因的重组菌，分别构建重组菌pGEX-6p-1-BoMCP-1和重组菌pET-30a-BoMCP-1。以纯化后的原核表达蛋白rHis-BoMCP-1为免疫原，3次免疫小鼠，选择阳性血清效价在1∶150 000以上的小鼠，以rGST-BoMCP-1为筛选抗原，经过细胞融合与单克隆筛选研制单抗。获得6株特异性强的BoMCP-1单抗，分别命名为3D10、4G9、4B6、1D8、3L4和6F5,亲和力常数分别为2.14×10～7、5.12×10～7、6.64×10～8、8.42×10～7、5.86×10～8、3.61×10～7 L·mol^-1。流式细胞术显示4G9与天然BoMCP-1具有良好的反应性。综上，该研究成功制备了特异性强、亲和力高、天然反应性良好的BoMCP-1单克隆抗体，可为进一步研究MCP-1在牛疫病的致病机制及诊断应用奠定基础。

关键词

牛 / 单核细胞趋化蛋白-1 / 单克隆抗体 / 流式细胞术