鸡RACK1基因克隆与生物信息学分析及其在鸡不同组织中的表达分析

摘要

为探究鸡活化蛋白激酶C1受体(RACK1)蛋白的生物学特性，及其在不同组织中的表达模式以及对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响，本研究克隆了鸡RACK1基因，并采用多种生物信息学方法对其编码的蛋白质进行结构与功能的预测。构建鸡RACK1基因的真核表达载体，通过Western blot技术验证质粒表达及其过表达对IBDV复制的影响，利用qRT-PCR技术检测鸡不同组织中RACK1的相对表达水平。结果显示，鸡RACK1蛋白编码317个氨基酸残基，分子量约34.87 ku,理论等电点为7.6。该蛋白不含跨膜结构域和信号肽，含有7个典型的WD40结构域，二级结构主要由无规则卷曲和延伸链构成，分别占比36.59%和45.11%。蛋白质相互作用预测提示其可能与RPL38、RPL27A、RPL23、RPLP0、RPS2等核糖体蛋白相互作用。系统发育分析显示RACK1在不同物种中高度保守。构建pCAGGS-HA-chRACK1真核表达载体，利用Western blot验证其在细胞中的表达，并通过IBDV感染模型发现RACK1的过表达可显著促进病毒的复制。进一步通过qRT-PCR检测鸡不同组织中的RACK1基因的表达情况，结果显示其在心脏中表达最高，在脾脏中表达最低。综上，本研究从分子水平解析了鸡RACK1蛋白的结构特征和组织分布特性，并证实其可正向调控IBDV的复制，为深入研究RACK1在鸡病毒感染与免疫应答中的功能提供重要的理论依据。

关键词

鸡 / RACK1基因 / 真核表达载体 / 生物信息学分析 / 组织表达