麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征

高雨晴 , 董钢印 , 张洪瑞 , 马占山 , 方丽 , 詹冬玲

doi:10.13413/j.cnki.jdxblxb.2023325

吉林大学学报(理学版) ›› 2024, Vol. 62 ›› Issue (03) : 742 -749. DOI: 10.13413/j.cnki.jdxblxb.2023325

麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征

高雨晴 , 董钢印 , 张洪瑞 , 马占山 , 方丽 , 詹冬玲

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摘要

以大型真菌灵芝中的麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶(MGAM)为研究对象，采用同源序列比对、同源模建、底物对接和定点突变等方法成功构建酶活力显著降低的突变体D246A.酶学性质表征结果表明：最适反应温度由野生型(wild type, WT)的65℃减少至60℃,突变体耐热能力下降；最适pH值由WT的6.0升高至7.0,有利于工程菌生长；半衰期由WT的2.0 h下降至1.5 h,酶稳定性降低.酶动力学结果表明：突变体D246A酶动力学曲线符合Michaelis方程，与WT相比，K_m值变大，表明酶与底物亲和力下降；V_(max)约降低至原来的1/4.