丹寿汤对复发性流产小鼠蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA表达谱的影响

摘要

目的:探讨丹寿汤对复发性流产小鼠蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA表达谱的影响。方法:将12只CBA/J雌鼠随机分为2组，每组6只，丹寿汤组灌胃丹寿汤1 mL/次，2次/d,模型组则灌胃等体积蒸馏水，连续7 d。停药3 d后，将雌鼠与DBA/2雄鼠合笼交配，诱导复发性流产，雌鼠继续灌胃蒸馏水或丹寿汤。于受孕第15天安乐处死孕鼠，称重胚胎并计算胚胎吸收率。收集蜕膜组织，免疫磁珠法分选蜕膜巨噬细胞，超速离心法提取外泌体，透射电镜下观察外泌体形态，Western blot法检测CD63表达。采用高通量测序技术检测外泌体miRNA表达情况，筛选差异miRNA,并与miRanda、miRWalk和miRDB数据库进行比对，筛选差异miRNA靶基因，对靶基因进行GO和KEGG富集分析。结果:丹寿汤组小鼠胚胎质量大于模型组，胚胎吸收率小于模型组(P<0.05)。共筛选出14个蜕膜巨噬细胞外泌体差异miRNA,其中5个(miR-466m-3p、miR-497a-3p、miR-7015-3p、miR-744-3p和miR-7679-5p)在丹寿汤组表达上调，9个(miR-222-5p、miR-541-5p、miR-3963、miR-669o-5p、miR-3062-5p、miR-34c-3p、miR-6976-5p、miR-3473g和miR-434-5p)表达下调。预测的靶基因有1 490个，GO和KEGG富集分析结果显示，靶基因功能主要为参与蜕膜巨噬细胞的细胞过程及组成等，主要涉及PI3K-Akt和MAPK等信号通路。结论:丹寿汤可能通过调控蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA的表达，发挥治疗复发性流产的作用。

关键词

复发性流产 / 丹寿汤 / 蜕膜巨噬细胞 / 外泌体 / miRNA / 小鼠