DpdtaA对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期、凋亡、副凋亡的影响

摘要

目的:探讨DpdtaA对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法:SH-SY5Y细胞用终浓度分别为0.156、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000μmol/L DpdtaA处理24 h,采用MTT法检测细胞增殖，计算增殖抑制率。SH-SY5Y细胞分为对照组(给予二甲基亚砜)和DpdtaA组(0.5μmol/L DpdtaA),处理24 h后采用PI染色法检测细胞周期，Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡，在倒置显微镜和透射电镜下观察细胞形态和超微结构，采用荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平。另取细胞，分4组，采用Western blot检测DpdtaA与ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)单独及联合作用后细胞凋亡相关蛋白ALG-2相互作用蛋白X(Alix)的表达。结果:DpdtaA可呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖，半数抑制浓度为(0.54±0.13)μmol/L。与对照组比较，DpdtaA组细胞周期阻滞在G0/G1期，细胞凋亡增多(P<0.05);DpdtaA组细胞核周围有大量空泡，线粒体肿胀，ROS水平升高，提示可能发生副凋亡。DpdtaA处理后Alix蛋白表达水平下降；NAC预处理后，Alix蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:DpdtaA能够抑制SH-SY5Y细胞增殖，引起周期阻滞，诱导细胞凋亡和副凋亡，部分机制可能与上调ROS及抑制Alix蛋白表达有关。

关键词

DpdtaA / 神经母细胞瘤 / SH-SY5Y细胞 / 增殖 / 副凋亡 / 氧化应激 / 凋亡相关基因2相互作用蛋白X