茵芋碱对类风湿关节炎大鼠的治疗作用及可能机制

摘要

目的:探索茵芋碱对类风湿关节炎大鼠的治疗作用及可能机制。方法:近交系DA大鼠分为4组，每组4只。模型组和低、高剂量茵芋碱组注射150μL降植烷构建降植烷诱导关节炎(PIA)模型，对照组注射生理盐水;造模成功后低、高剂量茵芋碱组大鼠每日灌胃20、40 mg/kg茵芋碱，模型组给予生理盐水，持续3周。分别在给药第7、14、21天，检测大鼠爪体积，并进行关节炎指数(AI)评分。第21天取滑膜组织，HE染色观察组织学，Western blot法检测蛋白酪氨酸磷酸酶非受体1型(PTPN1)，自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62和Beclin 1的表达。类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)分为4组，对照组正常培养，茵芋碱组给予60μmol/L茵芋碱，茵芋碱+sh-NC组和茵芋碱+sh-PTPN1组分别转染sh-NC或sh-PTPN1 24 h后再给予60μmol/L茵芋碱。继续培养24 h后，采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞中PTPN1 mRNA和蛋白表达，采用Ed U、Transwell小室、Annexin V-FITC/PI双染法和Western blot法检测细胞增殖、侵袭、凋亡以及自噬关键蛋白的表达。结果:与对照组相比，模型组大鼠爪体积增加，AI评分升高，滑膜组织严重阻塞水肿，毛细血管增生，滑膜组织中PTPN1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达水平降低，p62蛋白表达水平升高，提示自噬受抑;低、高剂量茵芋碱组尤其是高剂量茵芋碱组上述指标较模型组均有改善(P<0.05)。与对照组相比，茵芋碱组细胞增殖及侵袭能力受抑，凋亡率升高，PTPN1 mRNA和蛋白的表达升高，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达水平升高，p62蛋白表达水平降低(P<0.05)，提示自噬水平增强;而PTPN1沉默可逆转茵芋碱的作用效果(P<0.05)。结论:茵芋碱可能通过靶向PTPN1激活自噬进而缓解类风湿关节炎。

关键词

类风湿关节炎 / 茵芋碱 / 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体1型 / 自噬 / 大鼠