RIP3参与的线粒体DNA-cGAS-STING信号通路在HK-2细胞缺氧-复氧模型中的作用

摘要

目的:探究RIP3参与的线粒体DNA(mtDNA)-cGAS-STING信号通路在HK-2缺氧-复氧(H-R)细胞模型中的作用机制。方法:构建H-R细胞模型，取对数生长期HK-2细胞，于无葡萄糖和血清的特殊培养基中缺氧培养3、6和12 h后复氧，同时设置对照组，采用MTT法检测细胞存活率，Western blot检测RIP3、cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1β、NF-κB蛋白表达水平，RT-qPCR检测RIP3、cGAS、STING mRNA表达水平。细胞转染及加入RU.521(cGAS抑制剂)、Mito-TEMPO(线粒体ROS特异性清除剂)和溴化乙锭(EtBr)验证cGAS-STING信号通路激活机制，免疫荧光染色法测定mtDNA水平。结果:与对照组相比，H-R 3、6、12组细胞存活率均降低，mtDNA-cGAS-STING信号通路中相关蛋白RIP3、cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1β、NF-κB及RIP3、STING mRNA表达水平均上升，H-R 6、12组cGAS mRNA表达水平均上升(P<0.05)。与H-R 12+si-NC组相比，H-R 12+si-cGAS组细胞存活率升高，RIP3、cGAS、STING mRNA表达水平均降低；与H-R 12组相比，H-R 12+RU.521组与H-R 12+Mito-TEMPO组RIP3、cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β和IL-1β蛋白表达水平均降低(P<0.05)。H-R处理12 h可增加胞质双链DNA且其与线粒体共定位，而EtBr处理可减少胞质mtDNA(P<0.05)。结论:H-R可影响HK-2细胞活力及mtDNA-cGAS-STING信号通路，cGAS在其中起重要作用，且胞质mtDNA对cGAS-STING轴有调节作用。

关键词

缺氧-复氧 / HK-2细胞 / RIP3 / 线粒体DNA-cGAS-STING信号通路