木犀草素对膀胱癌5637细胞活力、焦亡及NLRP3-Caspase-1-焦亡素D通路的影响

摘要

目的:探讨木犀草素对膀胱癌5637细胞活力、焦亡的影响及其分子机制。方法:CCK-8法检测低、中、高剂量(25、50、100μmol/L)木犀草素分别处理5637细胞12、24、48 h后细胞活力。5637细胞分为5组,正常对照组(PBS)、阳性对照组(5μmol/L焦亡诱导剂尼日利亚霉素)以及木犀草素低、中、高剂量组(25、50、100μmol/L木犀草素),处理24 h后采用免疫荧光染色法检测焦亡素D(GSDMD)蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、IL-18、IL-1β分泌量,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot法检测焦亡通路蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD及炎症因子IL-1β、IL-18的表达。另取5637细胞分为3组:正常对照组、木犀草素低剂量组和焦亡抑制剂组(25μmol/L木犀草素+20μmol/L Caspase-1抑制剂VRT-043198),处理24 h后采用Western blot法检测Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的表达。结果:随木犀草素作用时间的增加、剂量的增大,5637细胞活力有降低的趋势(P<0.05)。与正常对照组比较,木犀草素各剂量组及阳性对照组GSDMD蛋白大量聚集在细胞膜上,细胞LDH、IL-1β和IL-18分泌增加,提示诱发焦亡;同时细胞内ROS含量增加,NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达上调(P<0.05)。另外,与木犀草素低剂量组相比,焦亡抑制剂组Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白的表达下调(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过激活NLRP3-Caspase-1-GSDMD通路,诱导膀胱癌细胞焦亡,抑制细胞活力。

关键词

木犀草素 / 膀胱癌 / 焦亡 / 焦亡素D / 5637细胞 / NLRP3-Caspase-1-GSDMD通路