USP14过表达对黑色素瘤A-375细胞铁死亡和恶性生物学行为的影响

摘要

目的:探究泛素特异性蛋白酶(USP)14通过Wnt/β-catenin信号通路对黑色素瘤细胞铁死亡和恶性生物学行为的影响。方法:取人恶性黑色素瘤A-375细胞,分为对照组(常规培养,不处理),USP14过表达(OE-USP14)组(经OE-USP14慢病毒感染48 h),RSL3组(常规培养,加入终浓度为1μmol/L的铁死亡诱导剂RSL3处理24 h),OE-USP14+RSL3组(经OE-USP14慢病毒感染后,更换为含1μmol/L的RSL3处理24 h)。采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中USP14、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4、蓬乱蛋白(Dvl)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达;C11-BODIPY荧光探针与ROS检测试剂盒检测脂质过氧化和ROS水平;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;CCK-8及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖和凋亡情况。结果:USP14过表达可升高A-375细胞中GPX4 mRNA及蛋白表达水平,降低脂质过氧化和ROS水平,增强细胞增殖和侵袭能力,升高Dvl、GSK-3β和β-catenin表达水平;RSL3处理后细胞上述指标的变化趋势相反(P<0.05)。USP14过表达与RSL3处理对细胞中上述指标存在交互作用(P<0.05)。结论:USP14过表达可能通过激活A-375细胞Wnt/β-catenin信号通路,上调GPX4表达,抑制铁死亡,并促进细胞的恶性生物学行为。

关键词

泛素特异性蛋白酶14 / Wnt/β-catenin信号通路 / 铁死亡 / 黑色素瘤 / A-375细胞