南蛇藤素靶向PI3K/Akt通路诱导耐利妥昔单抗弥漫大B细胞淋巴瘤细胞铁死亡

摘要

目的:探讨南蛇藤素通过诱导铁死亡治疗复发难治弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL）的作用及可能机制。方法:采用浓度梯度法构建耐利妥昔单抗淋巴瘤细胞株SU-DHL-2-R;CCK-8法检测不同浓度南蛇藤素处理后的细胞活力；将SU-DHL-2-R细胞分为对照组、南蛇藤素组、铁死亡抑制剂（Fer-1）组和南蛇藤素+Fer-1组，qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测铁死亡相关基因溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达水平，试剂盒检测谷胱甘肽（GSH）、Fe²⁺水平，DCFH-DA探针法检测活性氧水平，蛋白免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（Akt）和p-Akt蛋白表达。将SU-DHL-2-R细胞皮下注射到重症联合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency, SCID）小鼠建立淋巴瘤荷瘤小鼠模型，分为对照组和南蛇藤素药物干预组，观察小鼠生存状态，测量肿瘤体积，免疫组化检测小鼠淋巴瘤组织SLC7A11和GPX4表达。结果:成功建立SU-DHL-2-R耐药淋巴瘤细胞株模型，耐药指数为12。南蛇藤素可显著抑制SU-DHL-2和SU-DHL-2-R增殖。与对照组相比，南蛇藤素组SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达下调，GSH水平下降，诱导活性氧累积，增加Fe²⁺产生，p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平显著下调；与南蛇藤素组相比，南蛇藤素+Fer-1组SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达上调，GSH水平上升，活性氧减少，p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平明显上升。建立淋巴瘤荷瘤小鼠模型，与对照组相比，南蛇藤素干预后小鼠肿瘤体积减小，SLC7A11和GPX4表达均明显降低。结论:南蛇藤素可以通过靶向PI3K/Akt信号通路诱导铁死亡，从而抑制复发难治DLBCL进程。

关键词

弥漫大B细胞淋巴瘤 / 南蛇藤素 / PI3K/Akt信号通路 / 铁死亡 / 利妥昔单抗耐药