TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶色谱模型的构建及亲和行为研究

沈鑫; 池昊; 唐唯佳; 童珊珊

doi:10.13312/j.issn.1671-7783.y240113

江苏大学学报(医学版) ›› 2025, Vol. 35 ›› Issue (05) : 376 -380. DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y240113

TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶色谱模型的构建及亲和行为研究

沈鑫, 池昊, 唐唯佳, 童珊珊

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摘要

目的:构建原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)-脂筏@琼脂糖凝胶生物亲和色谱模型，并初步应用于TrkA靶向药的亲和吸附及稳定性研究。方法:通过溴化氰固定配体的偶联反应制备TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶固定相并表征，30 d内重复上样实验考查其稳定性。亲和吸附实验考查TrkA靶向药在空白琼脂糖凝胶柱和TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶柱上的亲和吸附行为。结果:蛋白免疫印迹结果显示，脂筏含有浮舰蛋白(Flotillin-1)、小窝蛋白(Caveolin-1)及TrkA蛋白。将U251细胞脂筏与琼脂糖凝胶偶联后，经过多倍柱体积缓冲液冲洗，脂筏仍能在柱床上实现较稳定的固载。吸附实验证明TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶固定相具有特异性亲和吸附作用。结论:成功构建了TrkA-脂筏@琼脂糖凝胶生物亲和色谱模型，初步验证该模型的可行性与稳定性。