工程化的PMN-MDSCs来源外泌体在胶原诱导性关节炎小鼠中的应用

陈玉梅; 戴锦东; 张一珂; 李泽兰; 朱栋炜; 朱成栋

doi:10.13312/j.issn.1671-7783.y240130

江苏大学学报(医学版) ›› 2025, Vol. 35 ›› Issue (01) : 1 -7. DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y240130

工程化的PMN-MDSCs来源外泌体在胶原诱导性关节炎小鼠中的应用

陈玉梅, 戴锦东, 张一珂, 李泽兰, 朱栋炜, 朱成栋

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摘要

目的:使用电穿孔方法对多形核髓源性抑制细胞(polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells, PMN-MDSCs)来源的外泌体(exosomes, Ex)进行工程化改造，观察其对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)模型小鼠疾病进程的干预作用。方法:构建CIA模型小鼠，磁珠分选PMN-MDSCs,运用超滤技术联合试剂沉淀法制备培养上清液中的PMN-Ex,免疫印迹法检测Ex标志性蛋白。使用电穿孔技术对PMN-Ex进行改造并设置分组，包括未处理的PMN-Ex组，电转miR-93-5p mimics NC组(miR-93-5p mimics NC组)以及电转miR-93-5p mimics组(miR-93-5p mimics组)。利用实时荧光定量PCR检测miR-93-5p的装载效率。流式细胞术检测改造后的Ex对Th17细胞分化的影响。将不同组别的PMN-Ex尾静脉注射到CIA小鼠体内，分别观察足趾外观情况、足趾HE染色切片情况，测定小鼠的平均关节炎指数(mean arthritic index, MAI)、腘窝淋巴结Th17的比例、血清IL-17A水平，以此判断不同组别PMN-Ex对CIA小鼠的干预作用。结果:PMN-MDSCs被成功分选并制备了PMN-Ex。荧光定量PCR结果显示，miR-93-5p mimics组中miR-93-5p的表达水平明显高于miR-93-5p mimics NC组。相比miR-93-5p mimics NC组，miR-93-5p mimics组处理的小鼠足趾红肿轻微，关节结构较完整；MAI、腘窝淋巴结Th17细胞比例以及血清IL-17A水平明显降低。结论:使用miR-93-5p mimics工程化改造后的PMN-Ex可以更有效地延缓CIA小鼠的疾病进程。