丁酸钠激活自噬改善油酸和AGEs诱导的肝细胞脂质沉积和炎症反应

摘要

目的:研究丁酸钠(NaB)对油酸(OA)和晚期糖基化终末产物(AGEs)的抑制作用，探讨其对HepG2细胞脂质沉积和炎症反应的影响及机制。方法:将HepG2细胞分为5组：对照组(NC组),细胞未经任何处理；OA组，0.05 mmol/L OA处理细胞2 h; OA+AGEs组，0.05 mmol/L OA和200μg/mL AGEs共处理细胞2 h; OA+AGEs+低浓度NaB组(NaB-L组)和OA+AGEs+高浓度NaB组(NaB-H组),其中NaB-L组和NaB-H组细胞分别经100和400μmol/L NaB预先处理24 h,再加入0.05 mmol/L OA和200μg/mL AGEs处理2 h。采用油红O染色检测细胞内脂质沉积，qRT-PCR法检测细胞炎性因子、线粒体自噬相关基因和胆固醇代谢相关基因的mRNA水平。蛋白质印迹法检测细胞中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和泛素结合衔接子(P62)蛋白表达，以及细胞色素C(CytoC)蛋白在线粒体和胞质中的分布；流式细胞术检测细胞活性氧和线粒体膜电位水平。结果:与NC组相比，OA+AGEs组脂质颗粒增多，NLRP3、Caspase-1、IL-1β、HMGR mRNA表达以及P62蛋白、胞质中CytoC蛋白表达量和活性氧水平明显增加(P<0.05),线粒体膜电位明显降低(P<0.05)、LDLR、PINK1、Parkin mRNA表达、线粒体中CytoC及LC3-Ⅱ蛋白表达量明显减少(P<0.05)。与OA+AGEs组比较，NaB-L和NaB-H组脂质颗粒减少，NLRP3、Caspase-1、IL-1β、HMGR mRNA表达及P62、胞质CytoC蛋白表达量和活性氧水平明显降低(P<0.05),并显著增加线粒体膜电位(P<0.05)、LDLR、PINK1、Parkin mRNA表达、线粒体中CytoC、LC3-Ⅱ蛋白表达(P<0.05)。结论:NaB通过PINK1/Parkin通路增强线粒体自噬，减少活性氧积累和线粒体内CytoC释放至胞质，从而抑制OA/AGEs诱导的脂质沉积和炎症反应。

关键词

丁酸钠 / 晚期糖基化终末产物 / 非酒精性脂肪性肝病 / 脂质沉积 / 炎症反应 / 线粒体自噬