薯蓣皂苷元通过上调胃癌EMT抑制肽表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

摘要

目的:探讨薯蓣皂苷元(Diosgenin)对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及潜在的机制。方法:选择胃癌MKN-28和BGC-823细胞，分为对照组(常规培养)、溶媒组(培养基中加入与薯蓣皂苷元组等体积的乙醇)和薯蓣皂苷元组(培养基中分别加入终浓度为0.5、2和8μg/mL薯蓣皂苷元),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞胃癌EMT抑制肽(inhibitory gastric cancer EMT-related peptide, IGCE)相对表达量；另将胃癌细胞分为对照组(常规培养)、Lv-control组(培养基中加入重组慢病毒Lv-control)、Lv-IGCE组(培养基中加入重组慢病毒Lv-IGCE),病毒感染72 h,采用CCK-8检测细胞增殖活性，Trans-well法检测细胞侵袭能力；再将胃癌MKN-28和BGC-823细胞分为对照组(常规培养)、转染组(细胞转染pcDNA-IGCE-aa-GFP),转染48 h,显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达；选用pcDNA-IGCE-aa-GFP转染后的MKN-28细胞分为对照组(常规培养)、溶媒组(培养基中加入与薯蓣皂苷元组等体积的乙醇)、不同浓度薯蓣皂苷元组(培养基中分别加入终浓度为0.5、2和8μg/mL薯蓣皂苷元),共孵育48 h,采用蛋白印迹检测融合蛋白IGCE-aa-GFP表达；将胃癌MKN-28细胞分为对照组(常规培养)、Lv-IGCE-smORF组(培养基中加入慢病毒Lv-IGCE-smORF),病毒感染48 h,再经放线菌酮处理不同时间，分别于0、0.5、1、2、4和8 h采用蛋白免疫印迹检测Krüppel样因子4(KLF4)蛋白表达。结果:qRT-PCR结果显示，与对照组相比，薯蓣皂苷元组胃癌MKN-28和BGC-823细胞中IGCE相对表达量明显升高(P<0.05或P<0.01),且呈一定的浓度依赖性。细胞功能实验表明，与对照组相比，Lv-IGCE组胃癌MKN-28和BGC-823细胞增殖活性和侵袭能力明显降低(P均<0.01)。镜下观察结果显示，与对照组比较，转染组胃癌MKN-28和BGC-823细胞中有明显的绿色荧光信号。蛋白免疫印迹结果显示，与对照组比较，薯蓣皂苷元组转染后MKN-28细胞中IGCE-aa-GFP表达明显增强(P均<0.01),且呈一定的浓度依赖性。经放线菌酮处理后，Lv-IGCE-smORF组MKN-28细胞中KLF4蛋白表达在0.5、1、2、4和8 h均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:薯蓣皂苷元可能通过上调IGCE-aa表达并抑制KLF4蛋白降解，进而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。

关键词

胃癌 / 增殖 / 侵袭 / Krüppel样因子4 / 微肽 / 胃癌EMT抑制肽(IGCE)