rL-RVG通过调节小鼠巨噬细胞Raw264.7极化抑制小鼠Lewis肺癌细胞活力

摘要

目的:探讨稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent Newcastle disease virus La Sota strain expressing the rabies virus glycoprotein, rL-RVG)对小鼠巨噬细胞Raw264.7极化的影响，并分析极化后的小鼠巨噬细胞Raw264.7对小鼠Lewis肺癌细胞活力的影响。方法:将小鼠巨噬细胞Raw264.7分为4组，分别为空白对照组、rl-RVG不同浓度组(0.5、1、5 MOI),采用CCK-8法检测各组小鼠巨噬细胞Raw264.7活力。将小鼠巨噬细胞Raw264.7分为3组，分别为Raw264.7-M0型(完全培养基)、Raw264.7-M1型(经1μg/mL脂多糖+50 ng/mL IFN-γ诱导)、Raw264.7-M2型(经20 ng/mL IL-4诱导),相差显微镜下观察其形态特点；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定3组细胞相关标志物CD86 mRNA、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)mRNA表达量。将小鼠巨噬细胞Raw264.7分为4组，分别为Raw264.7-M1型、Raw264.7-M2型、rL-RVG+M0型、rL-RVG+M2型组，免疫荧光法测定CD86、Arg-1蛋白表达。qRT-PCR测定小鼠巨噬细胞Raw264.7相关细胞因子IL-4、IL-6、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达量。将加入条件培养基的小鼠Lewis肺癌细胞分为4组，分别为空白对照组、rL-RVG不同浓度组(0.5、1、5 MOI),CCK-8法测定小鼠Lewis肺癌细胞活力。结果:与空白对照组相比，1、5 MOI rL-RVG组细胞增殖率明显升高(P均<0.01)。Raw264.7-M0、M1、M2型巨噬细胞分别为圆形或椭圆形，扁平状或不规则，纤维状、拉长或梭形。与RAW264.7-M0型巨噬细胞相比较，RAW264.7-M1型CD86 mRNA相对表达量显著增加(P<0.01),RAW264.7-M2型Arg-1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)。与Raw264.7-M1型相比，rL-RVG+Raw264.7-M0型CD86相对荧光表达量明显升高(P<0.05);与Raw264.7-M2型相比，rL-RVG+Raw264.7-M2型CD86相对荧光表达量显著升高(P<0.05),Arg-1相对荧光表达量显著降低(P<0.05)。rL-RVG处理致TNF-α、IL-6 mRNA表达升高，IL-4、IL-10 mRNA表达降低。与空白对照组相比，0.5、1、5 MOI rL-RVG组小鼠Lewis肺癌细胞活力显著降低(P均<0.01)。结论:rL-RVG可在一定范围内(0.5～5 MOI)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1型巨噬细胞极化并抑制小鼠Lewis肺癌细胞活力。

关键词

稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的重组新城疫病毒 / 肺腺癌 / 巨噬细胞 / 表型 / 极化