重组新城疫病毒通过AMPK/Beclin-1轴促进胃癌细胞发生铁自噬

摘要

目的:探讨重组稳定表达狂犬病毒糖蛋白的新城疫病毒疫苗（recombinant avirulent Newcastle disease virus LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein, rL-RVG）对胃癌细胞铁自噬的影响及其潜在机制。方法:采用CCK-8法检测不同稀释倍数rL-RVG对胃癌HGC-27和SGC-7901细胞增殖能力的影响，并筛选出最适稀释倍数；采用蛋白免疫印迹法检测胃癌HGC-27和SGC-7901细胞中单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK）、磷酸化AMPK（phosphorylated AMPK,p-AMPK）和苄氯素1（Beclin-1）等AMPK/Beclin-1轴相关蛋白，以及核受体辅激活因子4（nuclear receptor coactivator 4,NCOA4）、铁蛋白重链（ferritin heavy chain, FTH1）和微管相关蛋白1A/1B-轻链3（light chain 3,LC-3）蛋白表达水平，同时采用细胞Fe²⁺荧光法测试盒检测细胞Fe²⁺含量。采用siRNA-beclin-1、AMPK抑制剂Compound C处理胃癌HGC-27和SGC-7901细胞，采用蛋白免疫印迹法检测AMPK/Beclin-1轴蛋白表达以及细胞Fe²⁺荧光法测试盒检测Fe²⁺荧光强度。用稀释10～3倍rL-RVG处理胃癌HGC-27和SGC-7901细胞，采用CCK-8法测定细胞增殖能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；划痕实验检测细胞迁移能力。结果:rL-RVG可显著抑制胃癌HGC-27和SGC-7901细胞增殖，且随着稀释倍数减小，病毒量增多，抑制能力逐渐增强（P均<0.05）;当稀释倍数为10～3倍时，与半数抑制浓度(IC₅₀)最为接近，故采用稀释10～3倍的rL-RVG进行后续实验。rL-RVG可引起胃癌HGC-27和SGC-7901细胞内AMPK、p-AMPK、Beclin-1、LC-3、NCOA4蛋白表达明显增加，Fe²⁺荧光强度明显增强，FTH1表达明显减少（P均<0.05）;敲低Beclin-1和抑制AMPK表达致胃癌HGC-27和SGC-7901细胞AMPK、p-AMPK、Beclin-1、LC-3、NCOA4蛋白表达明显减少，Fe²⁺荧光强度明显减弱，FTH1表达明显增加（P均<0.05）。稀释10～3倍的rL-RVG可显著抑制胃癌HGC-27和SGC-7901细胞增殖、侵袭及迁移能力，而Compound C可部分逆转rL-RVG对胃癌细胞的抑制作用（P均<0.05）。结论:rL-RVG可通过AMPK/Beclin-1轴影响相关蛋白表达，进而促进胃癌HGC-27和SGC-7901细胞发生铁自噬。

关键词

重组新城疫病毒 / 胃癌细胞 / 铁自噬 / 单磷酸腺苷活化蛋白激酶 / 苄氯素1