细胞外基质蛋白SVEP1对脂肪细胞脂解及产热功能的影响

摘要

目的:探究细胞外基质(ECM)蛋白SVEP1对脂肪细胞脂解及产热功能的影响。方法:利用前期构建的236例健康及肥胖个体腹部皮下脂肪组织(SAT)的RNA-seq数据库，分析SVEP1表达水平与BMI、脂肪量、脂肪百分比和腰围的相关性。3T3-L1前脂肪细胞株及人血管基质组分(SVF)细胞分别诱导分化为成熟脂肪细胞，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测罗格列酮及毛喉素刺激下Svep1在脂肪细胞中的表达变化；分析人SAT的RNA-seq数据库中基于SVEP1与其他基因RPKM值的Pearson相关系数(r>0.4,P<0.05),筛选共表达基因集并进行KEGG富集分析。利用慢病毒介导的shRNA技术，在分化成熟的小鼠米色脂肪细胞中敲减Svep1,通过qRT-PCR和蛋白质印迹法检测脂肪细胞产热相关基因及蛋白的表达变化，用三酰甘油检测试剂盒检测异丙肾上腺素(ISO)刺激下的脂解水平，并进一步利用蛋白质印迹法检测脂解相关蛋白的磷酸化水平。结果:人腹部SAT中SVEP1表达水平与肥胖相关指标(BMI、脂肪量、脂肪百分比和腰围)均呈正相关。冷刺激可引起小鼠体内棕色和米色脂肪细胞中Svep1转录水平下调；在罗格列酮或毛喉素刺激下，分化成熟的3T3-L1脂肪细胞和人脂肪细胞中Svep1的转录水平均下调；KEGG富集分析提示共表达基因集富集于脂解的调控和胰岛素抵抗相关通路。Svep1敲减可显著增加小鼠米色脂肪细胞中产热相关基因解偶联蛋白1(Ucp1)、碘甲状腺原氨酸脱碘酶2(Dio2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(Pgc1α)、超长链脂肪酸延伸酶3(Elovl3)、细胞凋亡诱导DFFA样因子A(Cidea)的表达，以及促进小鼠白色脂肪细胞中ISO刺激的脂解。结论:Svep1的表达与脂肪细胞功能之间存在联系，提示Svep1可能参与了肥胖相关的脂肪组织功能失调，并对肥胖的发生发展产生影响。

关键词

Svep1 / 脂肪细胞 / 脂解 / 产热 / 肥胖