冷冻消融术后坏死液对非小细胞肺癌A549和H1299细胞增殖和凋亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨冷冻消融术后坏死液对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)A549和H1299细胞增殖和凋亡的影响，并分析其免疫相关的作用机制。方法:选择NSCLC A549、H1299细胞系，分别设对照组(常规培养)和坏死液组(加入冷冻消融术后坏死液),采用CCK-8法检测细胞增殖水平、流式细胞术检测细胞凋亡；分别建立人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)与两种细胞系的间接共培养体系，通过人肿瘤微环境研究芯片(AAH-CYT-G5)检测80种免疫相关蛋白，进行差异蛋白筛选、聚类及GO/KEGG富集分析。结果:与对照组相比，A549和H1299细胞坏死液组细胞增殖率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。共培养实验结果显示，与对照组相比，坏死液组A549细胞共检测出68种差异蛋白(P<0.05),KEGG富集分析得到76条通路；H1299细胞共检测出70种差异蛋白(P<0.05),KEGG富集分析得到74条通路；两种细胞排名前10的共同差异蛋白分别为GM-CSF、IP-10、NAP-2、SDF-1、FGF-6、IL-6、Osteopontin和fractalkine;核心通路包括PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、JAK-STAT信号通路、IL-17信号通路和Ras信号通路。结论:冷冻消融术后坏死肿瘤细胞释放的裂解液可抑制NSCLC A549和H1299细胞增殖并促进其凋亡，可能通过调控免疫相关蛋白及关键信号通路来影响肿瘤免疫微环境，从而发挥抑瘤作用。

关键词

非小细胞肺癌 / 冷冻消融 / 肿瘤免疫微环境 / 坏死液 / 人肿瘤微环境研究芯片

基金资助

国家自然科学基金面上项目(82174458);国家自然科学基金青年科学基金项目(82405515); 国家重点研发计划资助项目(2018YFC1705102); 中央高校基本科研业务费专项资金资助北京中医药大学重点攻关项目(2020-JYB-ZDGG-127)