冷冻消融术后坏死液对非小细胞肺癌A549和H1299细胞增殖和凋亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨冷冻消融术后坏死液对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)A549和H1299细胞增殖和凋亡的影响，并分析其免疫相关的作用机制。方法:选择NSCLC A549、H1299细胞系，分别设对照组(常规培养)和坏死液组(加入冷冻消融术后坏死液),采用CCK-8法检测细胞增殖水平、流式细胞术检测细胞凋亡；分别建立人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)与两种细胞系的间接共培养体系，通过人肿瘤微环境研究芯片(AAH-CYT-G5)检测80种免疫相关蛋白，进行差异蛋白筛选、聚类及GO/KEGG富集分析。结果:与对照组相比，A549和H1299细胞坏死液组细胞增殖率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。共培养实验结果显示，与对照组相比，坏死液组A549细胞共检测出68种差异蛋白(P<0.05),KEGG富集分析得到76条通路；H1299细胞共检测出70种差异蛋白(P<0.05),KEGG富集分析得到74条通路；两种细胞排名前10的共同差异蛋白分别为GM-CSF、IP-10、NAP-2、SDF-1、FGF-6、IL-6、Osteopontin和fractalkine;核心通路包括PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、JAK-STAT信号通路、IL-17信号通路和Ras信号通路。结论:冷冻消融术后坏死肿瘤细胞释放的裂解液可抑制NSCLC A549和H1299细胞增殖并促进其凋亡，可能通过调控免疫相关蛋白及关键信号通路来影响肿瘤免疫微环境，从而发挥抑瘤作用。

关键词

非小细胞肺癌 / 冷冻消融 / 肿瘤免疫微环境 / 坏死液 / 人肿瘤微环境研究芯片