反复冻融与超声波处理制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果比较

摘要

目的:比较反复冻融法与超声波破碎法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果，筛选干细胞裂解液的最优制备方法。方法:将人皮肤成纤维细胞以1×10～5/mL、1×10～6/mL、5×10～6/mL、1×10～7/mL 4种密度重悬于生理盐水，分别采用反复冻融和超声波破碎法处理，通过BCA法检测细胞破碎率和蛋白质含量，筛选两种方法最佳制备条件；采用细胞划痕愈合实验、CCK-8法、Transwell实验分别检测人皮肤成纤维细胞划痕愈合能力、细胞活力、细胞迁移数，ELISA检测裂解液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)蛋白浓度。结果:超声波破碎法最佳条件为细胞浓度5×10～6/mL、超声处理5 min;反复冻融法最佳条件为细胞浓度5×10～6/mL、冻融3次(45 min)。两种方法细胞破碎率无显著差异(P>0.05),超声波破碎法制备的裂解液总蛋白含量更高；两种方法制备的裂解液对人皮肤成纤维细胞活力的影响无显著差异(P>0.05),反复冻融法制备的裂解液能显著促进人皮肤成纤维细胞迁移、提升细胞划痕修复效率(P<0.05)。ELISA结果显示，反复冻融法制备的裂解液中VEGF、SCF蛋白浓度显著高于超声波破碎法(P<0.05或P<0.01),EGF浓度无显著差异(P>0.05)。结论:反复冻融法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果优于超声波破碎法。

关键词

皮肤损伤修复 / 干细胞裂解液 / 反复冻融法 / 超声波破碎法 / 成纤维细胞