蜂毒PLA2原核表达及溶血作用研究

doi:10.13842/j.cnki.issn1671-8151.202309034

山西农业大学学报（自然科学版） ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (02) : 63 -70. DOI: 10.13842/j.cnki.issn1671-8151.202309034

蜂毒PLA2原核表达及溶血作用研究

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摘要

[目的]蜂毒（Bee＿Venom, BV）是天然的动物药，药理效应广泛，成分较为复杂。磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是蜂毒的重要活性成分和主要过敏原，可与蜂毒肽发挥协同作用，诱发溶血。本研究旨在通过原核系统表达并纯化出蜂毒磷脂酶A2(BvPLA2)蛋白，并通过溶血试验对比蜂毒（bee venom,BV）、蜂毒肽（melittin）以及BvPLA2的溶血效果。[方法]将已构建好的pET28a-BvPLA2融合表达载体转化到大肠杆菌BL21菌株中并通过IPTG低温诱导蛋白表达，对表达产物进行鉴定并纯化获得重组BvPLA2蛋白。采集小鼠眼球全血与生理盐水等体积混合配制成2%的红细胞混悬液，加入不同浓度的BvPLA2蛋白液、蜂毒液及蜂毒肽，通过酶标仪测定溶血率。[结果]经IPTG诱导后的表达产物在约15 kDa的分子量处呈现清晰的条带，与理论推算值一致。超声破碎后在上清及沉淀中均表达出特异性条带，且上清中的表达量与沉淀表达量基本一致。不同浓度的BvPLA2蛋白液均具有溶血效果，溶血率均超过5%，且低浓度BvPLA2溶血率较高。经对比得出，BvPLA2溶血率显著低于蜂毒和蜂毒肽（P<0.05）。[结论]通过原核表达系统成功诱导并纯化出可溶性目标蛋白BvPLA2，且BvPLA2具有一定的溶血效果，但溶血效果显著低于蜂毒和蜂毒肽。