bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响

摘要

【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列，通过lip3000转染至牛前体脂肪细胞，利用EdU染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量、增殖相关基因P21、P27、CDK1、CCND1、CCNE1、MCM3和PCNA及增殖相关蛋白PCNA和CDK1表达量的影响。利用油红O染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞脂滴累积、细胞分化相关基因PPARγ、CEBPα、SREBP1和FABP4及分化相关蛋白PPARγ、CEBPα和FABP4表达量的影响。利用生物信息学方法预测bta-miR-330的靶基因，采用RT-qPCR及双萤光素报告酶方法检测bta-miR-330与靶基因的靶向关系。【结果】bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化过程中表达量存在显著差异。过表达bta-miR-330可降低牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量，显著抑制细胞增殖相关基因MCM3、CCNE1和CCND1及相关蛋白PCNA和CDK1的表达。过表达bta-miR-330可促进牛前体脂肪细胞脂滴累积，显著促进细胞分化相关基因CEBPα和FABP4及相关蛋白PPARγ和FABP4的表达。抑制bta-miR-330的表达会在一定程度上出现与过表达相反的作用。在线软件预测长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)基因为bta-miR-330的靶基因，RT-qPCR和双萤光素报告酶载体试验结果表明，bta-miR-330和ACSL6存在靶向关系。【结论】bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化具有调控作用。

关键词

bta-miR-330 / 牛 / 前体脂肪细胞 / ACSL6基因