葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系的建立

黄强, 张强强, 顾沛雯

doi:10.13207/j.cnki.jnwafu.2025.04.009

西北农林科技大学学报（自然科学版） ›› 2025, Vol. 53 ›› Issue (04) : 89 -97. DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2025.04.009

葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系的建立

黄强, 张强强, 顾沛雯

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摘要

【目的】建立葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(recombinase polymerase amplification-lateral flow dipstick, LFD-RPA)检测体系，为快速准确诊断和有效防治葡萄霜霉病提供参考。【方法】依据葡萄霜霉病菌内转录间隔区(ITS)序列设计了PF1/PR1、PF2/PR2和PF3/PR3共3对引物及探针RPA-P,对葡萄霜霉病菌DNA的ITS序列进行PCR扩增，建立了葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系，并对其反应条件进行优化，对其特异性和灵敏性进行检测。【结果】建立了葡萄霜霉病菌LFD-RPA检测体系，引物PF1/PR1和探针RPA-P对靶标片段具有良好的特异性，检测条件为36℃扩增30 min,对葡萄霜霉病菌具有特异性；最低检测下限为10 pg/μL,灵敏性略低于常规PCR(1 pg/μL)和荧光定量PCR(100 fg/μL);对田间发病叶片的检测结果与常规PCR一致，准确性高。【结论】建立的葡萄霜霉病菌重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(LFD-RPA)检测体系，可以对目标物质进行快速、可视化检测，具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点，适宜推广使用。