大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备

摘要

【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus, LBBV)VP2蛋白的抗原性，为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因，构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原，皮下多点注射免疫新西兰大白兔，耳中央动脉采血并分离血清，通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价；利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体，用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性；采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1 266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明，重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白，符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体，其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1 024 000,可特异性识别LBBV VP2蛋白；血清中和试验结果显示，VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白，制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体，该多抗对LBBV具有中和作用。

关键词

大口黑鲈 / 大口黑鲈双RNA病毒 / VP2蛋白 / 多克隆抗体