牛病毒性腹泻病毒NS5A结构域与核糖体内部进入位点的相互作用

摘要

【目的】探究牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea viru, BVDV）NS5A的3个结构域与核糖体内部进入位点（internal ribosome entry site, IRES）的相互作用。【方法】采用PCR法扩增Ⅰ型BVDV病毒NS5A基因的3个结构域DomainⅠ、DoaminⅡ和DomainⅢ片段，分别连接到pET-28a（+）载体上，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，对表达产物进行Western Blot鉴定，并用镍柱法进行纯化。PCR扩增IRES DNA,转录获得IRES RNA。使用生物层干涉法（BLI）生物传感器（Gator Bio.）分子互作分析仪器对NS5A 3个结构域与IRES RNA的相互作用进行分析。【结果】成功表达并纯化了DomainⅠ、DoaminⅡ和DomainⅢ结构域重组蛋白，其质量浓度依次为76.2,96.8和57.7μg/mL。体外转录获得了IRES RNA,其质量浓度为2 056.2μg/mL。互作分析结果表明，NS5A的3个功能结构域中，只有DomainⅡ与IRES具有明显的相互作用，且这种互作存在快结合快解离的现象，其与IRES的亲和力为7.93×10^-6μmol/L。【结论】BVDV NS5A蛋白是调控IRES起始翻译的重要蛋白，其主要作用部位为DomainⅡ。

关键词

NS5A蛋白 / 牛 / 核糖体内部进入位点 / 牛病毒性腹泻病毒复制