连翘苷-柚皮素抗APAP肝损伤的作用机制

摘要

【目的】探讨连翘苷-柚皮素(phillyrin-naringenin,PN)缓解对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的潜在作用机制。【方法】通过网络药理学筛选PN与药物性肝损伤(drug-induced liver injury, DILI)的交集靶点,将其导入STRING数据库进行蛋白互作网络分析筛选核心靶点,并对核心靶点进行GO和KEGG分析。分子对接验证PN与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、肿瘤蛋白P53(tumor protein 53,P53)和细胞色素P450酶2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)的亲和力。将小鼠随机分为空白对照组(normal control,NC)、APAP组(APAP)、乙酰半胱氨酸组(N-acetylcysteine,NAC)、连翘苷-柚皮素低/中/高治疗组(low/medium/high dose PN treatnent,LPN/MPN/HPN),采用试剂盒检测不同处理小鼠谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、N-乙酰基-对-苯醌亚胺(N-acetyl-pbenzoquinone imine,NAPQI)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)和过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)水平及丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,用显微镜观察小鼠肝组织病变,采用探针法检测小鼠肝脏CYP2E1活性,并用Western blot检测CYP2E1、PI3K、AKT和P53蛋白变化。【结果】(1)网络药理学筛选PN和DILI作用靶点分别为426和2 576个,PN与DILI的交集靶点为288个,核心靶点为37个,且核心靶点集中在PI3K/AKT通路。分子对接结果表明,PN与PI3K、AKT、P53和CYP2E1蛋白结合较强。(2)与NC组相比,APAP组小鼠ALT和AST活性显著升高,显微观察发现小鼠肝组织有明显出血点与水肿情况;CYP2E1蛋白表达显著上升,APAP毒性产物NAPQI在肝组织中积累;谷胱甘肽和超氧化物歧化酶水平降低,MDA和H2O2含量增加;PI3K/AKT通路被抑制,P53蛋白表达上调。与APAP组相比,LPN、HPN和MPN组ALT和AST活性显著降低,肝组织水肿有所缓解;CYP2E1蛋白表达水平和NAPQI水平降低,谷胱甘肽和超氧化物歧化酶水平升高,MDA和H2O2含量降低,磷酸化PI3K和AKT蛋白表达水平升高,P53蛋白表达水平降低。【结论】PN可通过激活PI3K/AKT通路来抑制APAP代谢,缓解氧化应激,治疗APAP诱导的DILI。

关键词

连翘苷-柚皮素 / 氧化应激 / 药物性肝损伤 / PI3K/AKT通路