大鳍鳠dnd基因的克隆与表达特征分析

摘要

【目的】探究鱼类生殖细胞特异标记基因dnd在大鳍鳠性腺发育过程中的表达特征。【方法】采集1龄、2龄和4龄雌雄大鳍鳠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肠、脑、鳃及性腺组织卵巢和精巢，提取4龄大鳍鳠的卵巢总RNA，反转录合成cDNA，采用RACE技术克隆大鳍鳠dnd基因（Hmdnd）全长cDNA序列，测序后进行分析；以β-actin为内参基因，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法，检测dnd基因在1龄大鳍鳠不同组织以及不同发育时期性腺中的表达量；利用原位杂交技术分析dnd mRNA在生殖细胞中的表达定位。【结果】Hmdnd基因cDNA序列全长2 035 bp(GenBank登录号为PQ626051)，其中开放读码框1 131 bp，编码376个氨基酸。氨基酸序列比对和系统进化树分析结果表明，大鳍鳠与黄颡鱼dnd蛋白序列一致性最高（79.24%）。RT-qPCR结果表明，Hmdnd基因在大鳍鳠性腺组织特异表达，且在卵巢的表达量显著高于精巢，在其他组织中不表达。随着配子发育的进行，Hmdnd基因表达量显著下降。性腺切片RNA原位杂交研究结果显示，Hmdnd基因主要在生殖细胞的细胞质表达；在卵巢中，随着初级卵母细胞从Ⅰ期发育到Ⅱ期，Hmdnd表达量急剧增加，但随着初级卵母细胞发育到Ⅲ期，Hmdnd表达量下降至Ⅰ期初级卵母细胞水平；在精巢中，Hmdnd在精原细胞中表达水平最高，随着精子发育的推进，其表达水平逐渐降低，在精子细胞中不表达。【结论】Hmdnd基因可能在大鳍鳠性腺发育早期发挥着重要的作用。

关键词

大鳍鳠 / dnd基因 / 生殖细胞 / 性腺发育