miR-370-3p抑制TGF-β通路对延缓皮肤创面愈合的影响

摘要

【目的】探究miR-370-3p在皮肤创面愈合中的作用，明确其能否作为miRNA治疗皮肤异常愈合的潜在靶点。【方法】将24只雄性C57BL/6小鼠随机均分为miR-370-3p干预组（miRNA组）、阴性对照组（NC组）和空白对照组（CON组），麻醉后建立8 mm背部皮肤全层缺损模型，miRNA组和NC组小鼠创面消毒后分别单次涂抹miR-370-3p模拟物（miR-370-3p-agomiR）和阴性对照模拟物0.02 mg/只，CON组小鼠创面只进行消毒处理。建模后0,7及14 d，观察记录创面愈合情况，统计愈合率。建模后7和14 d，取创面及周围组织样本，部分组织样本用40 g/L多聚甲醛溶液固定，制作切片，进行病理组织学分析。采用TargetScan、miRWalk及miRDB软件预测miR-370-3p的靶基因，对靶基因进行KEGG通路富集分析。取组织样本，利用Western blot和RT-qPCR技术检测Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平，以及TGF-β信号通路关键分子（TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7）的基因与蛋白表达水平。【结果】与CON组、NC组相比，miRNA组创面愈合速度变慢，愈合率显著降低（P<0.05），炎症反应较强；建模后7 d新生胶原纤维占比极显著下降，炎症细胞增多，COLⅠ和α-SMA表达水平显著降低（P<0.05）；建模后14 d新生胶原纤维增多，但排列紊乱；CD31阳性血管密度显著减少（P<0.05）。miR-370-3p靶基因KEGG富集分析发现，TGF-β信号通路与皮肤伤口愈合相关。RT-qPCR结果显示，miRNA组TGF-β信号通路中的TGF-β1、Smad3、Smad4表达水平显著或极显著下降，而负反馈抑制因子Smad7表达水平显著升高（P<0.05）;Western blot结果证实，miRNA组TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7蛋白的表达水平均显著或极显著降低（P<0.05）。【结论】miR-370-3p可通过抑制TGF-β信号通路，影响胶原沉积、组织收缩及新生血管生成，进而延缓皮肤创面愈合。研究结果提示，miR-370-3p可作为调控动物皮肤创伤修复的潜在靶点。

关键词

miR-370-3p / TGF-β信号通路 / 创面愈合 / 胶原重塑 / 小鼠