Plectin通过诱导F-actin聚合增强肝癌细胞的迁移能力

摘要

目的 研究Plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系，揭示Plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法 首先，Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中Plectin的表达。其次，构建Plectin下调的肝癌细胞株，设立对照组（shNC组）和sh PLEC组，各组分别设溶剂对照组（shNC+DMSO组或sh PLEC+DMSO组）和F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide组（shNC+Jasp组或sh PLEC+Jasp组）。采用Western blot检测各组肝癌细胞中Plectin的表达及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关分子（N-cadherin、vimentin和E-cadherin）的表达；采用Transwell小室法分析肝癌细胞的迁移能力；采用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析与Plectin基因有关的信号通路；采用免疫荧光技术检测Plectin表达变化对细胞骨架F-actin聚合的影响。结果 与正常肝细胞相比，Plectin在肝癌细胞中高表达。与shNC组相比，sh PLEC组Plectin的表达降低（P<0.05），肝癌细胞的迁移能力减弱（P<0.05）,EMT进程被抑制（N-cadherin和vimentin表达降低，E-cadherin表达升高）（P<0.05）;KEGG分析发现细胞骨架F-actin调控与Plectin的联系最为密切，sh PLEC组肝癌细胞骨架F-actin发生解聚。采用F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide处理后，与sh PLEC+DMSO组相比，sh PLEC+Jasp组肝癌细胞迁移能力增强（P<0.05）,EMT进程有所恢复（N-cadherin和vimentin表达升高，E-cadherin表达降低）（P<0.05），同时肝癌细胞骨架F-actin聚合亦有所恢复。结论 Plectin在肝癌细胞中高表达，肝癌细胞中Plectin通过诱导F-actin聚合促进肝癌细胞的迁移和EMT。

关键词

Plectin / 肝癌细胞 / 细胞迁移分析 / 上皮-间质转化 / 细胞骨架 / F-actin