基于催化发夹自组装技术的新型冠状病毒靶RNA快速荧光检测法的建立

摘要

目的 建立一种基于催化发夹自组装技术（catalytic hairpin assembly, CHA）的新型冠状病毒（简称新冠病毒）靶RNA荧光检测法，实现对新冠病毒核酸的快速检测。方法 根据CHA反应原理，选择新冠病毒核衣壳蛋白基因（N基因，NC＿045512.2）上长24 nt的片段作为检测靶点（即靶RNA），设计合成发夹探针H1、H2，并在探针H1上修饰荧光基团和猝灭基团；在室温（25℃）下，向探针溶液中加入靶RNA引发CHA反应，通过检测反应过程中荧光强度的变化实现对靶RNA的快速检测；优化检测探针及反应条件，对方法的灵敏度和特异性进行评价。结果 成功建立了针对新冠病毒靶RNA的荧光CHA法，可于室温下在30 min内完成检测，该法除具有优良的特异性、可准确区分靶RNA和发生单碱基突变的靶RNA之外，还具有良好的灵敏度，检出限为50 pmol/L。结论 本研究所提出的方法实现了对新冠病毒靶RNA简单快速的检测，具有优良的特异性和灵敏度，有望通过进一步优化以用于临床新冠病毒核酸样本的快速检测。

关键词

新型冠状病毒 / 核酸检测 / 催化发夹自组装 / 荧光

基金资助

成都市科学技术局重大科技应用示范项目（No.2022-YF09-00011-SN）;; 四川省科学技术厅重点研发项目（No.2021YFS0005、No.2021YFS0179、No.2022YFS0513）;; 国家自然科学基金（No.82304196）资助