结核分枝杆菌Rv3432c蛋白的原核表达与生物信息学分析

摘要

目的 构建结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv3432c基因的原核表达质粒并进行体外表达，运用生物学信息学软件分析蛋白Rv3432c特征，探讨抗M.tb新型药物靶点。方法 以灭活的结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，PCR法扩增Rv3432c基因，并与表达载体pET-28a构建原核表达重组质粒。SDS-PAGE分析表达产物并利用亲和层析的方法进行纯化。采用Protparam、Pfam online tool、SOMPA、Protscale、TMHMM、Signalp 6.0、NetPhos3.1、SUMOsp 2.0、SWISS-MODEL等生物信息学软件分析蛋白Rv3432c的生物学特性。结果 pET-28a-Rv3432c重组质粒测序结果与目的基因完全一致；SDS-PAGE分析表明，该融合蛋白以可溶性蛋白形式存在，相对分子质量约为55×10～3，与预期大小相符。蛋白Rv3432c为亲水性蛋白（GRAVY值为-0.079）。蛋白Rv3432c为无跨膜结构域和信号肽的蛋白。Rv3432c二级结构主要由无规则卷曲（39.78%）和α-螺旋（39.57%）构成，结构比较松散。结论 成功构建M.tb蛋白Rv3432c的原核表达质粒，并利用生物信息学分析其结构，为进一步研究Rv3432c在结核病发生发展中的作用以及抗M.tb新型药物靶点奠定了基础。

关键词

结核分枝杆菌 / Rv3432c蛋白 / 原核表达 / 生物信息学