kisspeptin调控Notch1/Akt/Foxo1通路参与复发性流产患者子宫内膜蜕膜化

摘要

目的 kisspeptin是一种肿瘤抑制因子，由KISS1基因编码。Notch1/Akt/Foxo1是调节细胞增殖、分化的重要信号通路。本研究探讨kisspeptin通过Notch1/Akt/Foxo1信号通路调控子宫内膜蜕膜化在复发性流产（RSA）中的作用机制。方法 纳入2020年6月–2020年12月苏州大学附属第二医院生殖中心门诊收治的RSA患者45例及同期计划生育门诊择期人工流产女性50例，Western blot、RT-qPCR检测蜕膜组织中kisspeptin（及其基因KISS1）、蜕膜化标志物胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor binding protein 1, IGFBP1)、Notch1、Akt、Foxo1表达水平。使用siRNA干扰KISS1或添加kisspeptin10(kisspeptin的活性片段)处理永生化子宫内膜基质细胞（hESC）后，命名为siKP组或KP10组，并设转染空白siRNA的hESC为对照组，CCK8检测增殖情况。对3组hESC进行体外诱导蜕膜化，免疫荧光检测siKP组和KP10组细胞Notch1表达及蜕膜化形态差异，RT-qPCR和Western blot检测3组细胞IGFBP1、Notch1、Akt、Foxo1的表达。hESC添加Notch1、Akt、Foxo1对应抑制剂后诱导蜕膜化（以仅诱导蜕膜化、未添加抑制剂的hESC为正常对照组），检测4组细胞上述蛋白和基因的表达。建立正常妊娠（CBA/J×BALB/c）和复发性流产（CBA/J×DBA/2）小鼠模型，即NP模型和RSA模型，实验组分别给予kisspeptin10和kisspeptin234（阻滞剂）隔日1次腹腔注射（RSA-KP10组和NP-KP234组），对照组给予生理盐水隔日1次腹腔注射（RSA-NS组和NP-NS组），共4组，每组6只，取孕9.5 d的子宫组织，观察胚胎吸收的情况，检测上述蛋白和基因的表达。结果 与正常妊娠（NP）女性相比，RSA患者kisspeptin、IGFBP1、Notch1、Akt、Foxo1的蛋白及其基因表均降低（P<0.01或P<0.05）。hESC添加kisspeptin10后蜕膜化能力增强，Notch1、Akt、Foxo1的蛋白及基因表达增加，干扰KISS1后表达降低；免疫荧光见增殖状态的hESC呈细长形，蜕膜化后细胞变圆、变大，Notch1表达增加，添加kisspeptin10后蜕膜化程度增高，干扰KISS1后减弱；分别用Notch1、Akt、Foxo1抑制剂处理hESC，发现三者按Notch1/Akt/Foxo1的顺序依次调控（P<0.05）。与注射生理盐水组相比，正常妊娠小鼠注射kisspeptin234后吸收胎增多（P<0.001）,IGFBP1、Notch1、Akt、Foxo1的蛋白及基因表达下降（P<0.05）；复发流产小鼠注射kisspeptin10后吸收胎减少（P<0.001），上述蛋白及基因表达升高（P<0.05）。结论 kisspeptin可能通过Notch1/Akt/Foxo1信号通路调控子宫内膜蜕膜化，其表达下调导致蜕膜化不良，可能是导致RSA发病的原因之一。

关键词

kisspeptin / Notch1 / 子宫内膜蜕膜化 / 复发性流产