大鼠脑出血后内源性神经干细胞迁移和微环境中免疫细胞表型变化规律的关系

摘要

目的 研究脑出血（intracerebral hemorrhage, ICH）后内源性神经干细胞（endogenous neural stem cells,eNSCs)及再生微环境的变化规律，观察eNSCs迁移与微环境免疫细胞极化状态变化规律之间的关系，为临床神经修复研究提供研究基础。方法 采用胶原酶注射法造模，在体质量为280～300 g的成年雌性Sprague-Dawley大鼠脑组织注射Ⅶ型胶原酶（2 U）诱导脑出血，为模拟急性期（1周内）、亚急性期（1～3周）及慢性期（>3周）脑出血的时间点，在注射后第3天（3-day post injection, 3 DPI）、10 DPI、20 DPI、30 DPI取脑组织评价造模效果。采用DCX抗体对脑组织切片进行免疫荧光染色，观察不同时间脑组织中eNSCs迁移变化规律；采用CD206抗体、CD86抗体对脑组织切片进行免疫荧光染色，分别观察脑组织促炎型（M1型）免疫细胞和抑炎型（M2型）免疫细胞在脑出血后再生微环境变化规律。结果 在SD大鼠脑组织内注射Ⅶ型胶原酶可成功诱导大鼠自发性脑出血，血肿体积自3 DPI开始逐渐增加，到10 DPI时血肿体积达到最大。此后血肿逐渐吸收，在30 DPI时全部吸收。对脑组织eNSCs变化规律分析显示，在3 DPI时有少量eNSCs被激活但很快便减少，在10 DPI时eNSCs逐渐开始增多，到20 DPI时有大量eNSCs迁移至脑出血部位，而在30 DPI时eNSCs又明显减少（P<0.01）。对脑组织免疫微环境分析显示，促炎型（M1型）免疫细胞在10、20 DPI时明显增加（P<0.01），在30 DPI时减少。抑炎型（M2型）免疫细胞在3 DPI时开始逐渐增加，到20 DPI时明显减少（P<0.05），而在30 DPI时又出现增加。结论 大鼠脑出血后，向脑出血部位迁移的eNSCs先增多后减少，免疫微环境表现出先抑炎、再促炎、最后抑炎的变化规律。炎症对eNSCs迁移可能有刺激作用，但是过强的炎症激活对eNSCs的分化及进一步激活有抑制作用。脑出血后修复及脑保护早期（10 d内）及亚急性期（20 d内）可能是最佳的干预时机。

关键词

脑出血 / 微环境 / 内源性干细胞 / 脑组织修复 / 动物模型

基金资助

国家自然科学基金青年项目（No.52003177）;; 四川省科技计划重点研发项目（No.2022YFS0141）资助