circVRK1靶向miR-4428调控急性淋巴细胞白血病KOCL44细胞增殖及凋亡的分子机制研究

摘要

目的 分析circVRK1和miR-4428在急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）细胞增殖和凋亡中的关系。方法 体外培养ALL细胞KOCL44，实验分组为：pcDNA、pcDNA-circVRK1、anti-miR-NC、anti-miR-4428、si-NC、si-circVRK1、pcDNA-circVRK1+miR-NC和pcDNA-circVRK1+miR-4428组。qRT-PCR检测细胞circVRK1和miR-4428的表达水平；CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡；双荧光素酶报告实验检测circVRK1与miR-4428的靶向关系[实验分为circVRK1野生型报告质粒（WT-circVRK1）+miR-NC、WT-circVRK1+miR-4428、circVRK1突变报告质粒（MUT-circVRK1）+miR-NC和MUT-circVRK1+miR-4428组]；Western blot检测Ki-67、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达量。结果 相较于pcDNA组，pcDNA-circVRK1组的circVRK1表达上调（P<0.05）；与转染pcDNA或者转染anti-miRNC相比，转染pcDNA-circVRK1或anti-miR-4428后，KOCL44细胞活力和Ki-67蛋白表达降低（P<0.05），凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平增加（P<0.05）;circVRK1可负向调控miR-4428的表达，但该作用仅在转染WTcircVRK1的组别中体现；与pcDNA组相比，pcDNA-circVRK1组miR-4428表达降低（P<0.05）；与si-NC组相比，si-circVRK1组miR-4428表达增加（P<0.05）；与共转染pcDNA-circVRK1+miR-NC相比，共转染pcDNA-circVRK1+miR-4428后细胞活力升高（P<0.05）,Ki-67蛋白表达增加（P<0.05），凋亡率和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平降低（P<0.05）。结论 circVRK1过表达可通过下调miR-4428表达而减弱ALL细胞增殖能力及诱导细胞凋亡。

关键词

急性淋巴细胞白血病 / circVRK1 / miR-4428 / 细胞增殖 / 细胞凋亡

基金资助

国家自然科学基金（No.82101898）;; 辽宁省民生科技计划联合计划项目（No.2021JH2/10300092）资助