循环组蛋白诱导内皮功能障碍致脓毒症急性呼吸窘迫综合征的机制研究

摘要

目的 揭示组蛋白引起内皮功能障碍致脓毒症急性呼吸窘迫综合征的机制，为靶向组蛋白治疗脓毒症急性呼吸窘迫综合征提供实验依据。方法 体外实验首先采用梯度浓度组蛋白刺激人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC），探索体外最佳刺激浓度。进而采用组蛋白刺激HUVEC 24 h进行造模，将细胞分为：(1)空白对照组、(2)空白对照+瑞沙托维（Toll样受体4抑制剂）干预组、(3)组蛋白刺激组、(4)组蛋白+瑞沙托维干预组。使用流式细胞术测定HUVEC凋亡情况，Western blot法测定内皮细胞VE-cadherin表达情况，共聚焦荧光显微镜拍摄评估内皮细胞间黏着连接的完整性。体内实验采用6～8周22～25 g雄性C57BL/6小鼠，分别通过盲肠结扎穿孔及尾静脉注射50 mg/kg组蛋白构造脓毒症模型。实验动物分为：(1)空白对照、(2)空白对照+瑞沙托维干预组、(3)盲肠结扎穿孔模型组、(4)盲肠结扎穿孔+瑞沙托维干预组、(5)组蛋白模型组、(6)组蛋白+瑞沙托维干预组。24 h后，采用ELISA法检测各组小鼠血清中白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)质量浓度；使用Western blot法检测肺脏组织VE-cadherin表达情况；HE染色观察各组小鼠肺脏组织病理变化。在小鼠处死前30 min，于尾静脉注射伊文思蓝。处死小鼠后，取肺脏组织评估各组小鼠每单位质量肺脏中伊文思蓝染料浓度，计算肺脏内皮漏出率，评估肺脏内皮屏障完整性。结果 体外实验结果提示，与对照组相比，组蛋白刺激下HUVEC凋亡增加（P<0.05）, VE-cadherin表达减少（P<0.05），内皮细胞间黏着连接完整性被破坏；瑞沙托维可显著抑制组蛋白诱导的HUVEC凋亡及VE-cadherin表达减少，维持内皮细胞间黏着连接完整性。体内实验中，瑞沙托维可有效缓解盲肠结扎穿孔及组蛋白诱导的脓毒症小鼠血清中IL-6及TNF-α质量浓度增高，减轻小鼠肺脏组织VE-cadherin表达的下调（P<0.05），降低小鼠肺脏血管内皮通透性，改善小鼠肺脏组织病理损伤。结论 组蛋白通过与Toll样受体4结合导致血管内皮细胞表面VE-cadherin表达下降，破坏细胞间黏着连接完整性，引起肺脏组织病理损伤；使用Toll样受体4抑制剂可阻断组蛋白诱导的脓毒症急性呼吸窘迫综合征。

关键词

脓毒症 / 急性呼吸窘迫综合征 / 内皮功能障碍 / 循环组蛋白 / Toll样受体4