副干酪乳酪杆菌N1115的巨噬细胞免疫活化产物促进原代海马神经细胞发育

摘要

目的 初步探究副干酪乳酪杆菌N1115活菌介导免疫途径对体外培养的原代海马神经细胞发育的影响。方法 以适宜浓度的副干酪乳酪杆菌N1115活菌悬液为实验组，以肽聚糖（PGN）、脂多糖（LPS）为阳性对照，以RPMI1640培养基为空白对照，分别与RAW264.7细胞共培养，获得共培养上清液及细胞总RNA，测定细胞因子的表达及分泌情况。各组上清液经离心后以适当的比例与原代海马神经细胞共培养，收集共培养上清液，提取细胞总RNA，测定神经细胞突触发育相关基因的表达情况；原代海马神经细胞免疫荧光染色后对突触前后膜相关蛋白——突触后膜致密蛋白95（PSD95）、突触生长蛋白（SYP）及神经细胞成熟标志物——微管相关蛋白2（MAP-2）、双皮质素（DCX）进行定量分析，对神经细胞的形态发育进行测量。结果 与空白对照相比，N1115活菌干预RAW264.7细胞后，细胞免疫功能激活，白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA相对表达量分别提高7 471%、926%，分泌量分别提高184.16 pg/mL、12 320.76 pg/mL，差异均有统计学意义（P<0.05）;N1115活菌的激活能力强于PGN，但弱于LPS，差异有统计学意义（P<0.05）。与空白对照相比，N1115活菌-RAW264.7细胞共培养上清液干预原代海马神经细胞后，10%上清干预组原代海马神经细胞活率提升19.25%，差异有统计学意义（P<0.05），突触前后膜SYP、PSD95 mRNA相对表达量分别提高137%、159%，差异有统计学意义（P<0.05）。N1115活菌上清干预组神经细胞的突起总长度（489.88μm）较空白对照组（381.51μm）增加，胞体面积（2 092.22μm²）、轴突长度（184.78μm）、突起总长度、平均突起长度（108.38μm）、分支点（4.84个）较两阳性对照组升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 副干酪乳酪杆菌N1115可激活巨噬细胞的免疫调节功能，从而促进神经细胞的形态发育以及突触功能。

关键词

副干酪乳酪杆菌N1115 / 神经发育 / 免疫 / 原代海马神经细胞