幽门螺杆菌cgt基因表达量测定活菌的方法建立及应用研究

摘要

目的 本研究旨在建立一种通过幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）cgt基因表达量来检测活菌的方法，以便为临床精准治疗开发快速、便捷的检测手段。方法 通过培养法对活菌计数，并利用RT-qPCR方法测定相应H.pylori胆固醇-α-葡萄糖基转移酶（cholesterol-α-glucosyltransferase,CGT）保守编码基因cgt （hp0421）的mRNA表达水平，分析菌落数与cgt基因表达量之间的相关性，并构建回归方程；探索该方法可测定的线性范围、灵敏度和特异性。将此方法用于测定克拉霉素杀菌作用，验证其在细菌耐药检测中有效性。结果 H.pylori菌落数为10～2、10～4、10～6、10～8 CFU/mL的cgt的Ct值分别是29.67±0.14、23.37±0.36、17.65±0.37、11.38±0.39，在H.pylori菌落数为10～1～10～8 CFU/mL范围内，RT-qPCR法测定的cgt基因表达量和活菌数对应的回归方程：y=-0.350 1x+12.49，决定系数R²=0.999 2、灵敏度为10～1 CFU/mL，此方法与13种其他菌无交叉反应。用0、5、10、20、40μg/mL质量浓度的克拉霉素作用12 h后培养法测定H.pylori的活菌lg值分别为2.57±0.02、2.45±0.01、2.19±0.02、1.91±0.07、1.33±0.05，对应cgt基因的Ct值分别为27.76±0.09、28.37±0.24、29.51±0.14、30.11±0.12、31.66±0.11，将cgt基因表达量代入上述方程推算活菌数为2.73±0.03、2.52±0.08、2.11±0.05、1.89±0.02、1.33±0.04，经分析差异无统计学意义（P>0.05）。结论 本研究成功建立了通过测定H.pylori的cgt基因表达量反映活菌的方法，有效缩短了检测周期，为临床活菌检测提供了新方法。

关键词

幽门螺杆菌 / cgt基因 / 基因表达量 / 活菌测定