人参皂苷Rg3对脂多糖诱导的胶质细胞-神经元互作损伤模型的保护作用

摘要

目的 探究人参皂苷Rg3对脂多糖诱导的胶质细胞-神经元互作损伤模型的保护作用。方法 培养原代小胶质细胞及HT-22细胞株，实验分为对照组（Control, CON）、100 ng/mL LPS组（LPS）、炎症模型组（CM）、人参皂苷Rg3组、炎症模型组+人参皂苷Rg3(CM+Rg3)，其中Rg3剂量分别为2.5、5、10和20μmol/L。CM组和CM+Rg3组制备胶质细胞-神经元互作模型。通过免疫荧光检测原代小胶质细胞纯度，CCK-8检测各组HT-22细胞活力，ELISA试剂盒检测各组细胞样本中炎性细胞因子[白细胞介素（interleukin, IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)和IL-10]的水平变化。ROS试剂盒检测细胞氧化损伤程度，Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达，Caspase-3酶活试剂盒检测各组细胞Caspase-3酶活性。结果 培养的小胶质细胞纯度达95%以上，可用于后续实验。不同剂量的人参皂苷Rg3刺激后HT-22存活率与CON组相差不大，100 ng/mL LPS刺激后神经元细胞存活率为98%，表明Rg3和LPS对神经元细胞的存活率无影响。与CON组相比，CM组HT-22细胞存活率降低（P<0.01），与CM组相比，CM+Rg3组神经细胞存活率增加（P<0.01），表明胶质细胞-神经元互作模型制作成功。其中Rg3剂量为10μmol/L时，CM+Rg3组HT-22细胞存活率最高（P<0.05），因此选择10μmol/L Rg3用于后续实验。100 ng/mL LPS刺激后，HT-22细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10浓度与CON组差异无统计学意义。100 ng/mL LPS刺激后，小胶质细胞IL-1β、TNF-α的浓度高于CON组（P<0.05），但LPS+Rg3组IL-1β、TNF-α的浓度低于LPS组（P<0.05）。CM+Rg3组活性氧浓度比CON略高，但低于CM组（P<0.01）。CM+Rg3组Bax的表达比CON高，低于CM组；Bcl-2表达比CON组低，高于CM组（P<0.01）。CM组Caspase-3酶活性高于CON组（P<0.01）;CM+Rg3组Caspase-3酶活性低于CM组（P<0.01）。结论 人参皂苷Rg3可能通过调控胶质细胞损伤，减少炎症因子的分泌，抑制神经元的凋亡，发挥缓解神经元凋亡的作用。

关键词

人参皂苷Rg3 / 胶质细胞-神经元互作损伤模型 / 脂多糖 / 凋亡