鳖甲煎丸通过p62/Keap1/NRF2信号通路调控肝癌细胞铁死亡的作用机制研究

摘要

目的 探讨鳖甲煎丸通过p62/Keap1/NRF2通路调控肝癌细胞铁死亡的作用机制，为该方防治肝癌提供实验依据。方法 将肝癌Huh7细胞分为对照组、鳖甲煎丸含药血清组、Erastin（铁死亡诱导剂）组、鳖甲煎丸含药血清+Erastin组、鳖甲煎丸含药血清+Ferrostatin-1(Fer-1，铁死亡抑制剂)组。通过动物实验制备鳖甲煎丸含药血清，并通过CCK-8实验筛选最佳药物干预浓度及时间。检测细胞内铁（Fe）、还原型谷胱甘肽（GSH）、脂质过氧化物（MDA）、活性氧（ROS）的含量；Western blot检测FTH1、GPX4、xCT、SLC40A1、p62、Keapl、NRF2的表达水平，JC-1染色检测线粒体膜电位，细胞免疫荧光检测p62、Keap1表达情况。结果 CCK-8实验表明，鳖甲煎丸高剂量（2.2 g/kg）细胞抑制率最高（P<0.001），用高剂量鳖甲煎丸药物血清处理48 h,Huh7细胞抑制率最高，因此采用高剂量鳖甲煎丸药物血清浓度、48 h为后续实验剂量和处理时间。与对照组比较，鳖甲煎丸含药血清组、Erastin组、鳖甲煎丸含药血清+Erastin组铁含量升高，GSH含量减低，MDA、ROS水平升高，同时FTH1、GPX4、xCT、SLC40A1、p62、NRF2表达降低，Keap1表达升高，细胞中线粒体膜电位降低（P<0.05）。结论 鳖甲煎丸可通过抑制p62/Keap1/NRF2通路调控肝癌Huh7细胞的铁死亡，从而达到防治肝癌的目的。

关键词

鳖甲煎丸 / 肝癌 / 铁死亡 / p62/Keapl/NRF2

基金资助

国家自然科学基金面上项目（No.82274286）; 广东省自然科学基金面上项目（No.2022A1515010007、2023A1515011089）资助