人参皂苷Rh₁抗肝纤维化的作用机制研究

摘要

目的 研究稀有人参皂苷Rh₁（ginsenoside Rh₁,G-Rh₁）是否可以降低由胆碱缺乏，L-氨基酸缺乏的高脂饮食（choline-deficient,L-amino acid-defined,high-fat diet,CDAHFD）诱导的肝纤维化，并探讨其可能存在机制。方法 将雄性C57BL/6J小鼠随机分为标准饲料组（Control组）、高脂饲料组（CDAHFD组）、水飞蓟素组（Silymarin,5 mg/kg）、G-Rh₁低剂量组（5 mg/kg）、G-Rh₁中剂量组（10 mg/kg）、G-Rh₁高剂量组（20 mg/kg），每组8只。Control组正常喂养，其余小组均以CDAHFD连续喂养7周建立小鼠肝纤维化模型；于第一周起，各给药组小鼠分别灌胃相应药液，每天1次，连续7周。末次给药后，称定各组小鼠体质量、脏器质量并得出脏器指数；HE染色、天狼星红染色和免疫组织化学染色（IHC）观察肝脏组织；Western blot检测肝纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）₁，通路相关蛋白成纤维细胞生长因子12（FGF-12）；检测血清生化指标天冬氨酸转移酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）。将小鼠巨噬细胞（RAW246.7）随机分为5组[对照组、脂多糖（LPS）组、3个给药组]。除对照组RAW246.7细胞只含有RAW246.7细胞和培养基外，其余组RAW246.7细胞均加入培养基、RAW246.7细胞和LPS（终浓度500 ng/mL）,3个给药组在此基础上分别加入10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L G-Rh₁。取5组RAW264.7细胞的上清液与大鼠肝星状细胞（HSC-T6）共培养24 h，观察比较G-Rh₁或LPS对HSC-T6中α-SMA、Ⅰ-a1型胶原蛋白（Col1a1）等纤维化相关蛋白，及对RAW264.7中FGF-12和p-STAT3/STAT3纤维化信号通路相关蛋白表达的影响；流式分析检测RAW264.7表型；ELISA检测促纤维化因子单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和TGF-β。结果 与正常Control组比较，CDAHFD组小鼠明显出现肝纤维化。与CDAHFD小鼠比较，G-Rh₁给药组小鼠肝纤维化均有一定缓解，存在剂量依赖相关性，且缓解效果优于对照药物水飞蓟素；同时，G-Rh₁可缓解CDAHFD导致的体质量下降（P<0.01），降低肝脏指数（P<0.01），血清AST、ALT、DBIL和TBIL含量显著下降（P<0.000 1），肝脏中α-SMA、TGF-β₁和FGF-12蛋白表达差异均有统计学意义（P<0.01）。与LPS组相比，LPS+G-Rh₁各组RAW264.7中FGF-12和p-STAT3/STAT3,HSC-T6中α-SMA和Col1a1的表达差异有统计学意义（P<0.001）;LPS+G-Rh1（20μmol/L、40μmol/L）组中Ly6C低表达RAW264.7向Ly6C高表达的转化比例显著降低（P<0.000 1），同时促纤维化因子MCP-1和TGF-β分泌减少（P<0.000 1），与HSC-T6的激活程度趋势一致。结论 G-Rh₁可预防改善CDAHFD诱导的小鼠肝纤维化，其机制可能与降低FGF-12过表达介导的RAW264.7表型转化相关。

关键词

人参皂苷Rh₁ / 肝纤维化 / 巨噬细胞 / 肝星状细胞 / FGF-12