淫羊藿次苷Ⅱ体外抗乙型肝炎病毒的作用及对线粒体分裂的影响

摘要

目的 探讨淫羊藿次苷Ⅱ（icariside, ICSⅡ）体外抗乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）的作用及对线粒体分裂的影响。方法 采用HBV阳性的肝癌细胞HepAD38作为细胞模型，CCK8法检测ICSⅡ的细胞毒性，ELISA和荧光定量PCR法检测ICSⅡ以及ICSⅡ联合恩替卡韦（entecavir, ENT）作用细胞后乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg）的分泌水平和HBV DNA拷贝量；使用激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察ICSⅡ对细胞线粒体形态和运动的影响；采用Western blot分析ICSⅡ作用后细胞线粒体动力学相关关键蛋白的表达水平；采用荧光染色法评估ICSⅡ对细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）生成的影响。结果 CCK8结果显示ICSⅡ25μmol/L作用72 h对细胞增殖无明显影响；ICSⅡ显著抑制细胞HBsAg（抑制率54.90%）和HBeAg（抑制率39.65%）的分泌水平（P<0.05）,ICSⅡ对细胞HBV DNA拷贝量的抑制率为15.19%,ENT对细胞HBV DNA拷贝量的抑制率为34.11%,ICSⅡ联合ENT后对HBV DNA拷贝量的抑制率为55.81%(P<0.05);ICSⅡ诱导HepAD38细胞线粒体变短，增强线粒体运动（P<0.05）；促进线粒体运动相关蛋白Mfn1、Fis1及p-Drp1(ser 616)表达升高（P<0.05）,Mfn2、Drp1及Drp1(ser 637)表达无明显变化（P>0.05）；抑制HepAD38细胞中ROS的产生（P<0.05）。结论 ICSⅡ抑制HepAD38细胞中HBV的复制，其机制可能与促进细胞线粒体分裂和抑制ROS的产生有关。

关键词

乙型肝炎病毒 / 淫羊藿 / 线粒体