女性HPV感染情况及基因型分析

Analysis on the infection status and genotype of female HPV

摘要

目的 通过分析延安市人民医院妇科门诊女性患者HPV感染情况与年龄分布之间的关系，为本地区宫颈癌的筛查、预防和治疗提供一定的参考依据。 方法 收集2023年1月至2024年3月在延安市人民医院就诊并接受HPV基因分型检测的10 738例女性患者资料，分析其HPV感染和基因型分布情况。 结果 10 738例样本中阳性样本为2 561例，HPV阳性感染率为23.85%。其中，单一感染样本为1 820例，占比71.07%；多重感染样本为741例，占比为28.93%。单一感染排名前5位的依次为HPV16、HPV52、HPV58、HPV53和HPV42型。多重感染排名前5位的依次为HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV44型。除≤20岁组、61~70岁组、>70岁组外，其余各年龄组的患者HPV感染以单一感染为主，各年龄组HPV亚型感染分布情况也有所不同。 结论 延安市人民医院妇科门诊女性患者HPV感染最常见的亚型为HPV16型、HPV52型、HPV58型，感染类型以单一感染为主，不同年龄段HPV感染率和亚型分布情况也有差异。

Abstract

Objective To analyze the correlation between the human papilloma virus （HPV） infection status and age distribution among female outpatients in the gynecological department of Yan'an People's Hospital， aiming to offer a certain reference basis for the screening， prevention and treatment of cervical cancer in this area. Methods Collect the data of 10 738 female patients who sought medical treatment in Yan'an People's Hospital and received HPV gene typing tests from January 2023 to March 2024， and analyze the situation of HPV infection and genotype distribution among them. Results Among the 10 738 samples incorporated into this study， 2 561 samples tested positive， and the HPV positive infection rate is 23.85%. Specifically， there were 1 820 samples with single infections， accounting for 71.07%， and 741 samples with multiple infections， accounting for 28.93%. The top five subtypes in terms of single infections were HPV16， HPV52， HPV58， HPV53 and HPV42 in sequence. As for multiple infections， the top five subtypes were HPV52， HPV16， HPV58， HPV53 and HPV44 in sequence. Except for the age groups of ≤20 years old， 61~70 years old and >70 years old， the HPV infections in the remaining age groups were predominantly single infections， and the distribution of HPV subtypes in each age group also varied. Conclusion The most prevalent subtypes of HPV infection among women in the gynecology outpatient department of our hospital are HPV16， HPV52 and HPV58，and the dominant infection type is single infection. Moreover， the infection rates and subtype distributions of HPV differ among different age groups.

Graphical abstract

关键词

HPV / HPV基因型 / 感染率 / 年龄组 / 宫颈癌

Key words

Human papilloma virus （HPV） / HPV genotypes / Infection rate / Age group / Cervical cancer

宫颈癌是全球第4大女性最常见癌症^［1］，也是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，对女性的生理健康和生命安全构成严重威胁。近年来，我国宫颈癌的发病率和死亡率正在逐步上升，这更应该引起人们的重视^［2］。人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染与宫颈癌的发生发展密切相关，且HPV基因型众多，不同地区人群HPV感染状况各有差异。因此，有针对性地进行HPV的筛查和基因分型检测，对于宫颈癌的预防、早期诊断和治疗具有一定的临床意义。本研究收集了2023年1月至2024年3月于延安市人民医院就诊并接受HPV基因分型项目检测的女性患者资料，分析HPV感染和基因型分布情况，从而为本地区宫颈癌的筛查、预防、临床干预和HPV疫苗接种提供一定借鉴。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2023年1月至2024年3月期间在延安市人民医院妇科门诊就诊并接受HPV基因分型项目检测的女性患者资料，共10 738例。纳入标准：妇科门诊患者或健康体检女性；行宫颈癌筛查；非孕期女性；非经期女性。排除标准：48 h内有性生活者；3 d内对阴道进行药物冲洗者；有宫颈或生殖道畸形者。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂

HPV检测所用试剂为广州安必平医药科技股份有限公司生产，采用DNA反向点杂交法。

1.2.2 仪器

实验所用主要仪器为全自动核酸分子杂交分析仪LBP-3124（广州安必平医药科技股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集

临床医生使用窥阴器或阴道扩张器将宫颈充分暴露，用无菌棉签擦去宫颈外分泌物，将宫颈刷伸入宫颈口，在宫颈内顺时针旋转4~6周以获取足量的上皮细胞，慢慢取出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的样本管中，完成取样，及时密闭送检。若样本黏液过多或者含血量过多应该尽量重新取样。

1.3.2 DNA提取

将细胞保存液样本管振荡混匀，取细胞保存液样本1~1.5 mL Eppendorf试管中，10 000 rpm离心5 min，弃上清，向带有沉淀的Eppendorf试管中加入1 mL生理盐水，振荡混匀，10 000 rpm离心5 min，弃上清。向带有沉淀的Eppendorf试管中加入50 μLDNA提取液（使用前振荡混匀），100 ℃裂解10 min。冷却至室温后，10 000 rpm离心5 min，取上清备用。

1.3.3 PCR扩增

取PCR反应管，6 000 rpm瞬时离心3 s后，取上述提取好的核酸5 μL对应加入各自PCR反应管。加样后的PCR反应管，盖紧管盖，6 000 rpm瞬时离心3 s后，放入PCR仪中扩增。PCR反应条件：50 ℃ 3 min，95 ℃ 15 min，40个循环（94 ℃ 40 s，55 ℃ 40 s，72 ℃ 40 s），72 ℃延伸7 min。阴性质控品和阳性质控品用同样方法进行加样扩增。

1.3.4 DNA杂交

杂交步骤按照说明书进行。将膜条按编号顺序放入对应膜槽，加入PCR产物40 μL，开始杂交。

1.3.5 结果判定

CC位点为显色控制点，显色表示杂交过程正常；PC位点为内参点，显色表示采样、DNA提取、PCR过程正常；其余各位点代表HPV各个型别。阴性质控品CC位点有蓝色斑点，其余位点均不显色；阳性质控品CC位点、PC位点及对应基因型位点出现蓝色斑点；样本膜条CC和PC位点出现蓝色斑点，表示实验有效。

1.4 统计学方法

采用EXCEL和SPSS26.0软件进行数据处理和分析。计数资料以n（％）表示，采用χ² 检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染的一般情况

进行HPV基因分型检测的10 738例标本中，HPV阳性样本为2 561例，感染率为23.85%。其中，单一感染样本为1 820例，感染率为16.95%，单一感染占比为71.07%（1 820/2 561）；多重感染（感染两种及两种以上HPV基因型）样本为741例，感染率为6.90%，多重感染占比为28.93%（741/2 561）。

2.2 单一感染和多重感染亚型分布情况

单一感染排名前5位的分别是HPV16型、HPV52型、HPV58型、HPV53型和HPV42型。多重感染排名前5位的分别是HPV52型、HPV16型、HPV58型、HPV53型和HPV44型。具体结果见表1，该表中多重感染重复计数。

2.3 不同年龄组HPV单一感染与多重感染情况

将进行HPV基因分型检测的患者按照年龄分为7组（≤20、21~30、31~40、41~50、51~60、61~70、>70岁），各年龄组感染情况不同。感染率由高到低依次为≤20岁组、61~70岁组、>70岁组、51~60岁组、41~50岁组、21~30岁组、31~40岁组，不同年龄组感染率差异具有统计学意义（χ²=144.27，P<0.001，表2）。

单一感染人群不同年龄组差异具有统计学意义（χ²=21.958，P<0.001），多重感染人群不同年龄组差异也存在统计学意义（χ²=53.212，P<0.001）。在2 561例HPV阳性感染者中，除≤20岁组、61~70岁组、>70岁组外，其余各年龄组的患者单一型别感染占比显著高于多重型别感染占比（表3，图1）。

2.4 不同年龄组HPV亚型感染分布情况

各亚型型别感染中，感染率由高到低排名前5位的依次为HPV16型、HPV52型、HPV58型、HPV53型和HPV42型。按年龄组统计，除≤20岁年龄组和>70岁年龄组以外，各亚型型别感染率由高到低排名前3位的均为HPV16型、HPV52型和HPV58型。各年龄组HPV亚型感染分布百分率见表4，该表中多重感染均按照单一亚型感染分别独立计数。

3 讨论

宫颈癌作为目前唯一病原学明确且可防可治的癌症，已经拥有非常完善的防控手段^［3］。迄今为止，已经发现的HPV病毒亚型超过200种，其中100多种都能对人体生殖系统造成不同程度的感染，HPV感染的基因型别与宫颈病变的程度也存在着特定的关联，由于各个亚型的特性差异，其对宫颈上皮的侵袭能力和所造成的宫颈病变程度也不尽相同。世界卫生组织基于大量临床研究和实践经验，明确推荐HPV检测作为宫颈癌筛查的首要方法^［4］，这种基于病原学检测的方法，相较于传统的筛查方式，具有更高的敏感性和特异性。因此，HPV检测对于宫颈癌的预防和筛查显得尤为重要。

HPV感染率在各个地区呈现出不同的状况，并且在不同年龄段中，HPV感染的基因型别以及感染率均存在着一定的差别。我国的HPV感染率不同地域有较大差异，如新疆地区的HPV感染率为54.84%^［5］，济南地区的HPV感染率为24.98%^［6］，北京朝阳区的HPV感染率为38.29%^［7］，厦门市的HPV感染率为12.85%^［8］，长春地区的HPV感染率为23.94%^［9］。不同地区女性HPV感染率的差异，是多种因素综合作用的结果，可能与我国各地区的经济文化水平、性教育普及程度、卫生资源、医疗条件的不均衡有关，也可能与各地区人们的生活习惯和HPV疫苗接种情况的差异相关。这更加凸显出各地区开展对本地HPV感染状况调研的必要性，唯有如此，才能获取本地区HPV感染更为精准的数据资料，进而为实施具有针对性的预防与治疗举措奠定基础，有效提升地区公共卫生健康水平，降低HPV感染相关疾病的发生率与危害程度。本研究中HPV感染率为23.85%，略低于王蕾等^［10］报道的陕西地区的HPV感染率（31.26%），但略高于张宁梅等^［11］报道的延安地区的HPV感染率（20.58%）。与陕西省其他地区的HPV感染状况也有所不同，如汪海英等^［12］报道的榆林地区HPV感染率为10%，王毅等^［13］报道的宝鸡地区HPV感染率为19.99%。一项全国性的研究^［14］显示，中国人群的HPV患病率为15%，而本研究中的HPV感染率高达23.85%，表明当地HPV流行态势较全国平均水平更为严峻，其潜在影响因素值得进一步深入探究。

本研究中HPV感染检出率最高的亚型分别是HPV16型（占12.45%）、HPV52型（占10.93%）、HPV58型（占8.13%）、HPV53型（占6.16%）和HPV42型（占5.62%），这与白素琴等^［15］报道的陕西汉中地区HPV感染率最高的亚型结果一致。大量研究^［16］表明，高危型HPV持续感染是宫颈癌及其癌前病变发生的主要因素。本研究中不同年龄组亚型感染率排名前三的HPV16型、HPV52型、HPV58型均为高危型别，长期持续的感染状态，可能会诱发宫颈上皮病变乃至宫颈癌。此外，高危型的HPV感染还可能与阴道癌、外阴癌、肛门癌等其他癌症存在一定的关联性^［17］，这更应该引起我们的关注和重视。

以上研究的7个不同年龄段分组中，可以得出HPV感染具有一定的年龄段差异，本研究中≤20岁组、61~70岁组、>70岁这3个年龄组HPV感染率相对较高。这可能与以上3个年龄组与其他年龄组相比较总样本例数相对较少有关，也可能和这3个年龄组女性人群自身特征相关，如≤20岁组女性人群自身免疫系统发育不全、初次性行为年龄较早，61~70岁组和>70岁女性免疫功能低下、个人卫生清洁不到位等。此次这3个年龄组纳入研究的样本数较不充分，这可能使得基于现有数据得到的结论存在一定偏差，后续仍然需要大量研究和数据来支撑。同时，各地区应该鼓励25岁以上女性定期进行自身的HPV筛查，对HPV感染早发现、早治疗，以期预防宫颈癌和宫颈其他相关病变等。

预防性HPV疫苗是全世界范围内率先推出的针对肿瘤预防的疫苗，旨在大幅度降低宫颈癌发病率，力求早日消除此类癌症。有研究^［18］表明，截至2021年，全球约20%的15岁以下女孩至少接种了一针剂HPV疫苗，而中国大陆的接种比例远远低于全球平均水平。HPV疫苗接种作为防控HPV感染和相关疾病的有效措施^［19］，各地区应加强关于疫苗接种的健康教育，倡导适龄女性尽快接种，以预防HPV感染和相关疾病。除了市面上常见的HPV疫苗以外，近年来，一些治疗性HPV疫苗也正处于积极研发阶段，期待能够早日问世，为HPV感染患者提供创新性的治疗策略^［20］。

综上所述，延安市人民医院妇科门诊女性患者HPV感染最常见的亚型为HPV16、HPV52和HPV58，以单一感染为主，且均为高危型。尤其是≤20岁和>60岁年龄段女性人群感染率较高，应及时采取有效措施进行干预。当地应加强健康宣传教育，提高当地的整体医疗服务水平，做好宫颈癌的早筛工作，积极倡导适龄人群尽快接种相对应的HPV疫苗，降低宫颈癌的发病率，为本地区女性的生殖健康筑牢坚实防线。

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