耳聋相关蛋白FCHSD2内耳相互作用蛋白的筛选与鉴定

摘要

目的 以耳聋相关蛋白FCH和双SH3结构域蛋白2(FCH and double SH3 domains protein 2, FCHSD2)为钓饵，利用酵母双杂交筛选FCHSD2内耳相互作用蛋白，对蛋白相互作用进行验证，通过生物信息学分析FCHSD2与其内耳互作候选蛋白可能参与的信号转导通路，为揭示FCHSD2功能缺失导致渐进性听力障碍的分子机制提供新的线索。方法 构建pBD-Gal4-musFchsd2钓饵蛋白载体，通过酵母双杂交技术筛选鸡内耳cDNA文库筛选FCHSD2互作蛋白；利用免疫共沉淀和荧光共定位实验验证候选蛋白与FCHSD2的相互作用；通过生物信息学分析FCHSD2与候选蛋白共富集信号通路。结果 FCHSD2在酵母系统中无自激活活性且无毒性，筛选获得内吞蛋白1(Intersectin1, ITSN1)、含SH3结构域的GRB2样蛋白1(SH3 domain-containing GRB2-like protein 1, SH3GL1)和泛素连接酶E2 I(Ubiquitin-conjugating enzyme E2 I, UBE2I)等候选互作蛋白；实验验证显示候选蛋白与FCHSD2存在相互作用；功能富集分析显示FCHSD2与ITSN1、SH3GL1等可能参与内吞、肌动蛋白聚合调控等过程。结论 内吞相关蛋白（ITSN1、SH3GL1）及泛素连接酶UBE2I与FCHSD2存在相互作用，它们与FCHSD2在内吞、肌动蛋白聚合调控等过程有富集。我们的研究为解析FCHSD2缺失引发静纤毛紊乱及渐进性听力损失的分子通路提供了关键靶点线索。

关键词

FCHSD2 / 酵母双杂交 / 免疫共沉淀 / 荧光共定位 / 生物信息学