马铃薯StBIN2蛋白的原核表达、酶活分析及多克隆抗体制备

摘要

BIN2是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，前期研究发现BIN2在植物应对生物和非生物胁迫方面发挥重要调控功能，但对马铃薯StBIN2蛋白缺乏系统研究。为探究马铃薯StBIN2蛋白的生物学功能，采用PCR扩增的方式获得了马铃薯StBIN2基因，通过同源重组方式将StBIN2基因构建到pCold TF表达载体上，获得StBIN2蛋白，利用激酶活性试剂盒测定StBIN2蛋白的激酶活性，并将纯化的StBIN2蛋白注射新西兰大耳兔从而获得多克隆抗体。StBIN2基因全长1 149 bp，在16℃、1.0 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG）诱导下表达量最高，StBIN2蛋白的激酶活性在1.09 U/L时制备的多克隆抗体特异性较高，满足Western blotting分析。该研究为进一步揭示马铃薯StBIN2蛋白的生物学功能奠定了基础，有助于深入理解StBIN2基因在马铃薯中的功能机制，为马铃薯的遗传改良和抗逆育种提供理论依据和技术支持。

关键词

马铃薯 / BIN2蛋白 / 原核表达 / 多克隆抗体