Biphalin激活PI3K/Akt通路减轻氧糖剥夺/复氧诱导的神经元损伤

摘要

为了探究biphalin对氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）诱导的原代皮层神经元细胞损伤的影响及其机制，将神经元细胞分5组处理：对照组常规培养；OGD/R组仅构建OGD/R损伤模型；OGD/R+biphalin组细胞于造模过程中加入不同浓度biphalin(0.01、0.1、1、10 nmol/L);OGD/R+biphalin+纳洛酮组细胞在造模过程中用0.1 nmol/L biphalin和0.1 mmol/L纳洛酮处理；OGD/R+biphalin+LY294002组细胞在造模过程中用0.1 nmol/L biphalin和20μmol/L LY294002处理.采用CCK-8法、乳酸脱氢酶（LDH）释放法、碘化丙啶（PI）染色法测定biphalin对神经元细胞的影响.采用蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-Akt和Akt的蛋白表达情况.经CCK-8法检测细胞活力，选定0.1 nmol/L biphalin为最佳给药剂量.与对照组相比，模型组细胞活力明显下降，细胞凋亡率和LDH释放量增加，cleaved-caspase-3和Bax表达量升高. Biphalin处理组细胞较模型组存活率显著提高，LDH释放量减少，cleaved-caspase-3和Bax表达量减少，Bcl-2水平和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值升高.而阿片拮抗剂纳洛酮和PI3K抑制剂LY294002可以显著逆转biphalin的上述作用效果.这表明biphalin通过阿片受体激活PI3K/Akt通路从而减轻了OGD/R介导的神经元损伤.

关键词

biphalin肽 / 新生儿缺氧缺血性脑损伤 / 氧糖剥夺/复氧(OGD/R) / PI3K/Akt通路 / 原代皮层神经元细胞