鬼箭锦鸡儿化学成分研究

Study on chemical constituents of Caragana jubata (pall.) Poir.

摘要

对藏药鬼箭锦鸡儿［Caragana jubata （Pall.） Poir.］药材的地上部分及根部进行提取分离及纯化，并通过现代波谱技术鉴定分离得到化合物的结构. 研究从鬼箭锦鸡儿75%乙醇部位中分离得到19个化合物，分别鉴定为：erycibenin D （1）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷 （2）、苦参醇I （3）、（3R）-4′-methoxy-2′，3，7-trihydroxyisoflavanone （4）、蓝花赝靛素 （5）、6，7，2′-trihydroxy-4′-methoxyisoflavone （6）、大豆苷元 （7）、鸢尾黄素 （8）、（+）-5-甲氧基异落叶松脂素 （9）、（6aR，11aR）-3，4-dihydroxy-9-methoxypterocarpan （10）、（6aR，11aR）-3，8-dihydroxy-9-methoxypterocarpan （11）、lespedezol D₁ （12）、芒柄花素 （13）、7，3′-二羟基-5′-甲氧基异黄酮 （14）、甘草素 （15）、毛蕊异黄酮 （16）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷 （17）、山奈酚 （18）、（-）-紫檀素 （19）. 其中化合物1~11为首次从该植物中分离得到. 化合物1-3、5-7、9-12、14、16、19在一定程度上能够提高大鼠骨骼肌成肌细胞（L6细胞）的葡萄糖摄取能力，促摄取活性提升倍数为0.35~1.92倍，其中化合物3在所有分离的化合物中活性最强，在20 μg∙mL^-1浓度下能够提升1.92倍的促葡萄糖摄取活性.

Abstract

The aerial parts and roots of Caragana jubata （Pall.） Poir. were extracted and purified，and nineteen compounds were isolated from the 75% ethanol extract of Caragana jubata and identified as erycibenin D （1）， quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside （2）， kushenol I （3）， （3R）-4′-methoxy-2′，3，7-trihydroxyisoflavanone （4）， texasin （5）， 6，7，2′-trihydroxy-4′-methoxyisoflavone （6）， daidzein （7）， tectorigenin （8）， （+）-5-methoxy-isolariciresinol （9）， （6aR，11aR）-3，4-dihydroxy-9-methoxypterocarpan （10）， （6aR，11aR）-3，8-dihydroxy-9-methoxypterocarpan （11）， lespedezol D₁ （12）， formononetin （13）， 7，3′-dihydroxyl-5′-methoxyisoflavone （14）， liquiritigenin （15）， calycosin （16）， kaempferol 3-O-β-D-glucoside （17）， kaempferol （18） and pterocarpin （19）. Compounds 1-11 were isolated from this plant for the first time. The effects of the isolated compounds on the glucose uptake activity of rat skeletal muscle myoblasts （L6 cells） in vitro were evaluated. The results showed that compounds 1-3， 5-7， 9-12， 14， 16 and 19 could improve the glucose uptake ability of L6 cells to a certain extent， and the uptake activity increased by 0.35-1.92 folds. Among them， compound 3 exhibited the strongest activity among all the isolated compounds. It increased the glucose uptake activity by 1.92 folds at a concentration of 20 μg∙mL^-1.

Graphical abstract

关键词

鬼箭锦鸡儿 / 化学成分 / 异黄酮 / 葡萄糖摄取

Key words

Caragana jubata / chemical composition / isoflavone / glucose uptake

锦鸡儿属，作为豆科（Leguminosae）植物中独具特色的一员，在欧亚大陆的广阔地域内展现出其独特的生态魅力，这一属植物在全球范围内有98种^［1］. 中国为锦鸡儿属植物的主要原产地之一，境内约分布有66种该属植物. 这些锦鸡儿属植物主要集中分布于我国西北和西南的高原草原及荒漠区域，这些地区因其独特的气候条件和地理环境，为锦鸡儿属植物的生长提供了得天独厚的条件^［2-3］.

锦鸡儿属植物具有良好的药用价值，药用部位多为根和花部位^［4］. 鬼箭锦鸡儿是锦鸡儿属植物鬼箭锦鸡儿（Caragana jubata （pall.） Poir.）的根及枝叶，藏药名为“作毛兴”，主要分布于我国西北部，如青海、西藏、四川、甘肃、宁夏等省区，它是传统藏药中使用历史最悠久的品种之一^［5-6］.现代药理研究表明其提取物或所含的化学成分具有抗菌、降血压、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等活性. 化学成分研究表明鬼箭锦鸡儿药材主要化学成分包括异黄酮类、黄酮类、二苯乙烯低聚体类、挥发油类、糖苷类和有机酸类等^［6］，前期研究发现黄酮及异黄酮类化合物是抗糖尿病及抗肿瘤的主要活性成分^［8-9］.

本文采用硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱等多种方法，从鬼箭锦鸡儿75%乙醇提取物中分离得到19个化合物（图1），分别鉴定为erycibenin D（1）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（2）、苦参醇I（3）、（3R）-4′- methoxy-2′，3，7-trihydroxyisoflavanone（4）、蓝花赝靛素（5）、6，7，2′-trihydroxy-4′-methoxyisoflavone（6）、大豆苷元（7）、鸢尾黄素（8）、(+)-5-甲氧基异落叶松脂素（9）、（6aR，11aR）-3，4-dihydroxy-9-methoxypterocarpan（10）、（6aR，11aR）-3，8-dihydroxy-9-methoxypterocarpan （11）、lespedezol D₁（12）、芒柄花素（13）、7，3′-二羟基-5′-甲氧基异黄酮（14）、甘草素（15）、毛蕊异黄酮（16）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（17）、山奈酚（18）、（-）-紫檀素（19）. 其中包括9个异黄酮类化合物，5个黄酮及其苷类化合物，4个紫檀素类化合物和1个木脂素类化合物. 在大鼠骨骼肌成肌细胞（L6细胞）上测试所有分离的化合物的葡萄糖摄取活性，活性筛选结果显示化合物1-3、5-7、9-12、14、16、19在一定程度上能够提高L6细胞的葡萄糖摄取能力，促摄取活性提升范围在0.35~1.92倍，其中化合物3促进葡萄糖摄取活性效果最好，增强了1.92倍.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

核磁共振波谱仪（DRX-600 MHz型，德国Bruker）；半制备高效液相色谱仪（2535型）、液相质谱联用仪（ACQUITY SQD MS）均美国Waters；半制备液相色谱仪（P1050 UV1000，清博华科技）； 分光光度计（UH5300型，英国应用物理公司）；Silgreen C₁₈色谱柱（250 mm×10 mm， 5 µm，北京绿百草）；5PFP色谱柱（250 mm×10 mm，5 µm）、Cholester色谱柱（250 mm × 10 mm，5 µm）均购自日本COSMOSIL公司；柱色谱硅胶粉（300~400目，烟台江友）、薄层色谱硅胶GF₂₅₄板；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶（Amersham公司）；HP20型大孔吸附树脂（日本三菱）；甲醇、乙腈（色谱级， 美国TEDIA公司），其他试剂均为分析纯.

1.2 植物样品来源

实验材料于2018年采集于青海省玉树县，经青海省藏医药研究所多杰研究员鉴定为豆科锦鸡儿属植物鬼箭锦鸡儿［Caragana jubata （pall.） Poir.］. 鬼箭锦鸡儿样品现保存于湖北省武汉市中南民族大学药学院植物标本库（No. SC0885）.

1.3 提取与分离

取鬼箭锦鸡儿药材地上部分及根部9 kg，粉碎，75%的乙醇室温浸提（6×15 L，7 d/次），提取液减压浓缩至无醇味即得浸膏2.08 kg. 用大孔树脂柱层析进行分离，以水-乙醇梯度洗脱（洗脱剂中乙醇百分比分别为：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%）. 每1000 mL收集一次洗脱液，减压浓缩后置于试管中，用薄层色谱（TLC）检测合并得到6个组分（Fr.1-Fr.6）. Fr.3 （1.17 kg），用硅胶柱（300~400目）色谱进行分离，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（洗脱剂比例：200∶1、100∶1、90∶1、80∶1、70∶1、60∶1、50∶1、40∶1、30∶1、20∶1、10∶1、1∶1、甲醇），每500 mL收集一次洗脱液，减压浓缩后置于试管中，用TLC检测合并得到7个组分（Fr.3.1-Fr.3.7）. Fr.3.4 （303 g）经硅胶柱（GF254）色谱分离，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（洗脱剂比例：200∶1、100∶1、90∶1、80∶1、70∶1、60∶1、50∶1、40∶1、30∶1、20∶1、10∶1、1∶1），每500 mL收集一次洗脱液，减压浓缩后置于试管中，用TLC检测合并得到6个组分（Fr.3.4.1-Fr.3.4.6）.

Fr.3.6（225 g）经过中压硅胶柱（GF254）色谱进行分离，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100∶1、90∶1、80∶1、70∶1、60∶1、50∶1、40∶1、30∶1、20∶1、10∶1、1∶1、甲醇），每500 mL收集一次洗脱液，减压浓缩后置于试管中，用TLC检测合并得到5个组分（Fr.3.6.1-Fr.3.6.5）.

Fr.3.6.3 （34.7 g）过凝胶柱色谱，通过半制备高效液相色谱（HPLC）分离得到单体化合物1 （7.8 mg）. Fr.3.6.1 （95.8 g）过凝胶柱色谱后用半制备HPLC分离得到化合物2 （9.6 mg）、 3 （12.2 mg）和4 （5.8 mg）. Fr.3.4.5 （40.1 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物5 （26 mg）， 6 （33 mg）、7 （11.8 mg）. Fr.3.4.4 （60.2 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物8 （5.1 mg）和9 （7.8 mg）. Fr.3.4.3 （51.1 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物10 （19.5 mg）. Fr.3.4.2 （86.7 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物11 （23.2 mg）和12 （17.5 mg）. Fr.3.6.5 （23.7 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物13 （4.2 mg）， 17 （2.1 mg）和18 （5.6 mg）. Fr.3.6.3 （34.7 g）经凝胶柱色谱以及半制备HPLC分离得到化合物14 （15 mg）、 15 （6.7 mg）和19 （6.3 mg）. Fr.3.6.1 （95.8 g）经凝胶柱色谱和半制备HPLC分离得到化合物16 （13 mg）.

1.4 葡萄糖摄取实验

细胞培养：L6细胞复苏后加入完整培养基，在37 ℃、氧气环境和5% CO₂的加湿培养箱中培养. 当细胞生长到大约80%时，用分化培养基并继续分化为肌管细胞，在37 ℃和5% CO₂下放置一周. 培养基每2天更换一次，培养基仍然是分化培养基. 整个培养基为α-MEM （Hyclone， USA）含有10%胎牛血清的培养基（FBS， Hyclone， USA）和1%抗生素（100 μm∙L^-1青霉素和100 mg∙mL^-1链霉素），分化培养基为MEMα含有2%胎牛血清和1%的培养基抗生素.

实验方法：细胞葡萄糖检测试剂盒检测待测样品（单体化合物）的L6细胞葡萄糖摄取活性. 在96孔板中将L6细胞以1×10⁴~5×10⁴细胞/孔接种，每孔加入100 μL α-MEM培养基，过夜，换用含2% FBS的α-MEM培养基，每隔24 h换液一次，连续培养7 d，待L6细胞分化后换用不含血清的α-MEM培养基饥饿细胞2 h. 将待测样品用含2-NBDG的无糖培养基配置成20 μg∙mL^-1样品溶液（含150 μg∙mL^-1 2-NBDG）. 每孔加入含待测样品的培养基100 μL，于恒温细胞培养箱中孵育30 min. 设空白对照、胰岛素阳性对照组，每组3个复孔. 孵育结束后，将96孔板400 r/min离心6 min. 吸去上清液，每孔加入200 μL的试剂盒缓冲液，混匀后，室温下400 r/min离心6 min. 弃上清液，每孔加入100 μL缓冲液. 酶标仪激发波长/发射波长（485/535 nm）下检测各孔吸收值.

2 实验结果

2.1 结构鉴定

化合物1： C₁₆H₁₄O_6，黄色粉末； ESI-MS： m/z 301 ［M-H］^-. ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 7.73 （ 1H， d， J = 8.7 Hz， H-5）， 7.13 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2′‍）， 6.99 （1H， dd， J = 8.1， 1.9 Hz， H-6′‍）， 6.84 （1H， d， J = 8.1 Hz， H-5′）， 6.54 （1H， dd， J = 8.7， 2.2 Hz， H-6）， 6.34 （1H， d， J = 2.2 Hz， H-8）， 5.01 （1H， d， J = 11.9 Hz， H-2）， 4.58 （1H， d， J = 11.9 Hz， H-3）， 3.89 （3H， s， 3′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 194.5 （C-4）， 166.98 （C-7）， 165.17 （C-9）， 148.9 （C-3′‍）， 148.38 （C-4′‍）， 130.1 （C-1′‍）， 130.0 （C-5）， 122.2 （C-6′‍）， 115.9 （C-5′‍）， 113.5 （C-10）， 112.4 （C-2′‍）， 112.1 （C-6）， 103.7 （C-8）， 85.7 （C-2）， 74.5 （C-3）， 56.4 （3′-OCH₃）. 数据与文献［10］一致，故鉴定化合物1为erycibenin D.

化合物2： 黄色粉末； ESI-MS： m/z 463 ［M-H］^-， 其分子式为C₂₁H₂₀O₁₂； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 7.57 （2H， m， H-2′， 5′）， 6.83 （1H， d， J = 9.0 Hz， H-6′）， 6.38 （1H， s， H-6）， 6.17 （1H， s， H-8）， 5.47 （1H， d， J = 7.3 Hz， Glu-1）， 3.21 （6H， m， Glc-2~Glc-6）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 177.4 （C-4）， 164.9 （C-7）， 161.2 （C-5）， 156.4 （C-2）， 156.1 （C-9）， 148.6 （C-4′‍）， 144.9 （C-3′‍）， 133.3 （C-3）， 121.6 （C-6′‍）， 121.1 （C-1′‍）， 116.2 （C-5′）， 115.3（C-2′）， 103.7 （C-10）， 100.9 （Glc-1）， 98.9（C-6）， 93.6（C-8）， 77.61 （Glc-5）， 76.53 （Glc-3）， 74.12 （Glc-2）， 69.94 （Glc-4）， 60.98 （Glc-6）. 数据与文献［11］一致，故鉴定化合物2为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷.

化合物3： 淡黄色无定形粉末； ESI-MS： m/z 453 ［M-H］^-， 其分子式为C₂₆H₃₀O₇； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 7.24 （1H， d， J = 9.1 Hz， H-6′‍）， 6.33 （2H， m， H-3′， 5′）， 6.07 （1H， s， H-6）， 5.30 （1H， d， J = 11.9 Hz， H-3）， 4.90 （1H， m， H-4a）， 4.56 （1H， d， J = 11.9 Hz， H-2）， 4.50 （1H， m， H-9a₁）， 4.43 （1H， d， J = 2.6 Hz， H-9a₂）， 3.78 （3H， s， 5-OCH₃）， 2.50 （2H， m， H-3a）， 2.45 （1H， m， H-2a）， 1.93 （2H， m， H-1a）， 1.54 （3H， s， H-10a）， 1.52 （3H， s， H-7a）， 1.45 （3H， s， H-6a）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 194.2 （C-4）， 165.0 （C-5）， 164.2 （C-7）， 161.6 （C-9）， 160.0 （C-2′）， 158.7 （C-4′）， 149.7 （C-8a）， 132.0 （C-5a）， 130.6 （C-6′‍）， 124.9 （C-4a）， 115.9 （C-1′‍）， 111.2 （C-9a）， 109.5 （C-8）， 107.7 （C-5′‍）， 103.6 （C-3′‍）， 103.5 （C-10）， 93.3 （C-6）， 78.8 （C-2）， 73.3 （C-3）， 56.0 （5-OCH₃）， 48.1 （C-2a）， 32.6 （C-3a）， 27.9 （C-1a）， 25.9 （C-6a）， 19.0 （C-10a）， 17.9 （C-7a）. 数据与文献［12］一致，故鉴定化合物3为苦参醇I.

化合物4： 白色晶体； ESI-MS： m/z 303 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₆H₁₄O₆； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 7.65 （1H， d， J = 8.7 Hz， H-5）， 7.36 （1H， d， J = 8.6 Hz， H-6′）， 6.50 （1H， dd， J = 8.7， 1.9 Hz， H-6）， 6.43 （1H， dd， J = 8.6， 2.4 Hz， H-5′）， 6.30 （1H， d， J = 2.4 Hz， H-3′‍）， 6.29 （1H， d， J = 1.9 Hz， H-8）， 4.71 （1H， d， J = 11.8 Hz， H-2eq）， 4.04 （1H， d， J = 11.8 Hz， H-2ax）， 3.68 （3H， s， 4′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 188.1 （C-4）， 164.7 （C-7）， 162.5 （C-9）， 160.0 （C-4′）， 154.8 （C-2′‍）， 129.6 （C-5）， 128.3 （C-6′‍）， 118.6 （C-1′‍）， 112.2 （C-10）， 111.0 （C-6）， 104.0 （C-5′）， 102.4 （C-8）， 101.5 （C-3′）， 73.7 （C-2）， 73.5 （C-3）， 55.0 （4′-OCH₃）. 数据与文献［13］一致，故鉴定化合物4为（3R）-4'-methoxy-2'，3，7-trihydroxyisoflavanone.

化合物5： 无色针状结晶； ESI-MS： m/z 285 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₆H₁₂O₅； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 8.28 （1H， s， H-2）， 7.49 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-2′， 6′）， 7.37 （1H， s， H-5）， 6.97 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-3′， 5′）， 6.89 （1H， s， H-8）， 3.78 （3H， s， 4′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 174.4 （C-4）， 158.9 （C-4′）， 152.7 （C-2）， 152.6 （C-7）， 151.0 （C-9）， 144.8 （C-6）， 130.1 （C-2′， 6′）， 124.7 （C-3）， 122.4 （C-1′‍）， 116.5 （C-10）， 113.6 （C-3′， 5′）， 108.0 （C-5）， 102.7 （C-8）， 55.2 （4′- OCH₃）. 数据与文献［14］一致，故鉴定化合物5为蓝花赝靛素.

化合物6： 淡黄色针状晶体； ESI-MS： m/z 299 ［M-H］^-， 其分子式为C₁₆H₁₂O₆； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 8.15 （1H， s， H-2）， 7.34 （1H， s， H-5）， 7.10 （1H， d， J = 8.2 Hz， H-6′）， 6.89 （1H， s， H-8）， 6.44 （2H， m， H-3′， 5′）， 3.72 （3H， s， 4′- OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 175.0 （C-4）， 160.2 （C-4′）， 156.6 （C-2′）， 154.2 （C-2）， 152.7 （C-7）， 151.0 （C-9）， 144.8 （C-6）， 132.2 （C-6′）， 120.8 （C-3）， 116.3 （C-10）， 112.4 （C-1′）， 107.8 （C-5）， 104.7 （C-5′）， 102.7 （C-8）， 101.8 （C-3′）， 55.1 （4′-OCH₃）. 数据与文献［15］一致，故鉴定化合物6为6，7，2′-trihydroxy-4′- methoxyisoflavone.

化合物7： 白色粉末； ESI-MS： m/z 253 ［M - H］^-， 其分子式为C₁₅H₁₀O₄； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 8.27 （1H， s， H-2）， 7.95 （1H， d， J = 8.8 Hz， H-5）， 7.38 （2H， d， J = 8.6 Hz， H-2′， 6′‍）， 6.93 （1H， dd， J = 8.8， 2.1 Hz， H-6）， 6.85 （1H， d， J = 2.1 Hz， H-8）， 6.80 （2H， d， J = 8.6 Hz， H-3′， 5′）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 174.8 （C-4）， 162.8 （C-7）， 157.5 （C-9）， 157.2 （C-2）， 152.9 （C-4′）， 130.1 （C-2′， 6′）， 127.3 （C-5）， 123.5 （C-3）， 122.6 （C-1′‍）， 116.6 （C-10）， 115.3 （C-6）， 115.0 （C-3′， 5′）， 102.1 （C-8）. 数据与文献［16］一致，故鉴定化合物7为大豆苷元.

化合物8： 浅黄色固体； ESI-MS： m/z 299 ［M-H］^-， 其分子式为C₁₆H₁₂O₆； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 13.04 （1H， s， 5-OH）， 8.29 （1H， s， H-2）， 7.36 （2H， d， J = 8.6 Hz， H-2′， 6′‍）， 6.81 （2H， d， J = 8.6 Hz， H-3′， 5′）， 6.47 （1H， s， H-8）， 3.74 （3H， s， 6-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 180.5 （C-4）， 158.4 （C-4′）， 157.4 （C-7）， 154.0 （C-2）， 153.3 （C-9）， 152.9 （C-5）， 131.7 （C-6）， 130.3 （C-2′， 6′）， 121.8 （C-1′）， 121.4 （C-3）， 115.1 （C-3′， 5′）， 104.6 （C-10）， 94.1 （C-8）， 59.9 （6-OCH₃）. 数据与文献［17］一致，故鉴定化合物8为鸢尾黄素.

化合物9： 白色粉末； ESI-MS： m/z 389 ［M-H］^-； 其分子式为C₂₁H₂₆O₇； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 6.59 （1H， s， H-2）， 6.34 （2H， s， H-2′， 6′）， 6.12 （1H， s， H-5）， 3.73 （1H， m， H-7′）， 3.70 （3H， s， 3-OCH₃）， 3.68 （6H， s， 3′， 5′-OCH₃）， 3.58 （1H， dd， J = 10.7， 4.0 Hz， H-9′a）， 3.43 （2H， m， H-9）， 3.17 （1H， d， J = 10.7， 3.3 Hz， H-9′b）， 2.68 （2H， m， H-7）， 1.84 （1H， m， H-8′）， 1.64 （1H， m， H-8）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 147.8 （C-3′， 5′）， 145.5 （C-3）， 144.1 （C-4）， 136.2 （C-1′）， 133.7 （C-4′）， 132.5 （C-6）， 127.1 （C-1）， 116.2 （C-5）， 111.8 （C-2）， 106.6 （C-2′， 6′）， 63.5 （C-9）， 59.7 （C-9′）， 56.0 （3′， 5′-OCH₃）， 55.5 （3-OCH₃）， 46.5 （C-7′‍）， 45.7 （C-8′‍）， 38.1 （C-8）， 32.3 （C-7）. 数据与文献［18］一致，故鉴定化合物9为（+）-5-甲氧基异落叶松脂素.

化合物10： 白色粒状结晶； ESI-MS： m/z 417 ［M-H］^-； 其分子式为C₁₆H₁₄O₅； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 7.16 （1H， d， J = 8.2， H-7）， 6.84 （1H， d， J = 8.4 Hz， H-1）， 6.53 （1H， d， J = 8.4 Hz， H-2）， 6.44 （1H， dd， J = 8.2， 2.3 Hz， H-8）， 6.37 （1H， d， J = 2.3， H-10）， 5.48 （1H， d， J = 6.5 Hz， H-11a）， 4.34 （1H， m， H _α -6）， 3.73 （3H， s， 9-OCH₃）， 3.56 （1H， s， H _β -6）， 3.52 （1H， m， H-6a）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 162.6 （C-9）， 162.0 （C-10a）， 147.1 （C-3）， 145.8 （C-4a）， 134.3 （C-4）， 126.0 （C-7）， 122.1 （C-1）， 120.7 （C-6b）， 113.8 （C-11b）， 110.4 （C-2）， 107.2 （C-8）， 97.5 （C-10）， 80.3 （C-11a）， 67.9 （C-6）， 55.9 （9-OCH₃）， 41.0 （C-6a）. 数据与文献［19］一致，故鉴定化合物10为（6aR，11aR）-3，4-dihydroxy-9-methoxypterocarpan.

化合物11： 白色粒状结晶； m/z 285 ［M-H］^-； 其分子式为C₁₆H₁₄O₅； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 7.25 （1H， dd， J = 8.4 Hz， H-1）， 6.76 （1H， s， H-7）， 6.46 （2H， m， H-2， 10）， 6.28 （1H， d， J = 2.4 Hz， H-4）， 5.38 （1H， d， J = 6.8 Hz， H-11a）， 4.19 （1H， dd， J = 10.6， 4.6， H-6）， 3.78 （3H， s， 9-OCH₃）， 3.51 （1H， t， J = 10.6 Hz， Hα-6）， 3.44 （1H， m， H-6a）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 160.0 （C-3）， 158.0 （C-4a）， 154.1 （C-10a）， 149.5 （C-9）， 141.6 （C-8）， 133.1 （C-1）， 119.4 （C-6b）， 113.1 （C-11b）， 112.4 （C-7）， 110.7 （C-2）， 104.0 （C-4）， 96.2 （C-10）， 79.5 （C-11a）， 67.5 （C-6）， 56.6 （9-OCH₃）， 41.6 （C-6a）. 数据与文献［19］一致，故鉴定化合物11为（6aR，11aR）-3，8-dihydroxy-9-methoxypterocarpan.

化合物12： 白色粒状结晶； ESI-MS： m/z 285 ［M-H］^-； 其分子式为C₁₆H₁₄O₅； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 7.24 （1H， d， J = 8.4 Hz， H-1）， 6.98 （1H， s， H-7）， 6.46 （1H， dd， J = 8.4， 2.4 Hz， H-2）， 6.28 （1H， s， H-10）， 6.26 （1H， d， J = 2.4 Hz， H-4）， 5.43 （1H， d， J = 6.8， H-11a）， 4.22 （1H， m， H-6α）， 3.70 （3H， s， 8-OCH₃）， 3.54 （2H， m， H-6β， 6a）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 158.6 （C-3）， 156.3 （C-4a）， 153.3 （C-10a）， 147.4 （C-9）， 141.9 （C-8）， 132.1 （C-1）， 116.3 （C-6b）， 111.5 （C-11b）， 110.4 （C-7）， 109.6 （C-2）， 102.8 （C-4）， 98.2 （C-10）， 77.5 （C-11a）， 65.9 （C-6）， 56.8 （8-OCH₃）， 40.1 （C-6a）. 数据与文献［20］一致，故鉴定化合物12为lespedezol D₁.

化合物13： 白色无定形粉末； ESI-MS： m/z 267 ［M-H］^-， 其分子式为C₁₆H₁₂O₄； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 8.15 （1H， s， H-2）， 8.05 （1H， d， J = 8.8 Hz， H-5）， 7.46 （2H， d， J = 8.9 Hz， H-2′， 6′）， 6.98 （2H， d， J = 8.9 Hz， H-3′， 5′）， 6.93 （1H， dd， J = 8.8， 2.3 Hz， H-6）， 6.85 （1H， d， J = 2.3 Hz， H-8）， 3.85 （3H， s， 4′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 178.1 （C-4）， 164.7 （C-7）， 161.1 （C-4′）， 159.8 （C-8a）， 154.9 （C-2）， 131.4 （C-2′ 6′）， 128.5 （C-5）， 125.7 （C-3）， 125.5 （C-1′）， 118.2 （C-4a）， 116.5 （C-6）， 114.8 （C-3′， 5′‍）， 103.3 （C-8）， 55.7 （4′-OCH₃）. 数据与文献［21］一致，故鉴定化合物13为芒柄花素.

化合物14： 淡黄色针状结晶； ESI-MS： m/z 285 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₆H₁₂O₅； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 8.10 （1H， s， H-2）， 8.02 （1H， d， J = 8.8 Hz， H-5）， 7.01 （1H， d， J = 1.2 Hz， H-4′）， 6.94 （2H， s， H-2′， 6′）， 6.91 （1H， dd， J = 8.8， 2.3 Hz， H-6）， 6.82 （1H， d， J = 2.3 Hz， H-8）， 3.86 （3H， s， 5′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 178.0 （C-4）， 164.8 （C-7）， 159.8 （C-9）， 154.9 （C-2）， 149.2 （C-5′‍）， 147.4 （C-3′）， 128.5 （C-5）， 126.2 （C-3）， 125.8 （C-1′‍）， 121.6 （C-6′‍）， 118.1 （C-10）， 117.4 （C-4′）， 116.5 （C-6）， 112.6 （C-2′）， 103.2 （C-8）， 56.4 （5′-OCH₃）. 数据与文献［22］一致，故鉴定化合物14为7，3′-二羟基-5′-甲氧基异黄酮.

化合物15： 黄色针晶； ESI-MS： m/z 257 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₅H₁₂O₄； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 7.71 （1H， d， J = 8.7 Hz， H-5）， 7.30 （2H， d， J = 8.5 Hz， H-2′， 6′）， 6.80 （2H， d， J = 8.5 Hz， H-3′， 5′）， 6.48 （1H， dd， J = 8.7， 2.3 Hz， H-6）， 6.33 （1H， d， J = 2.3 Hz， H-8）， 5.36 （1H， dd， J = 13.1， 2.8 Hz， H-2）， 3.30 （1H， dd， J = 16.9， 13.1 Hz， H-3b）， 2.67 （1H， dd， J = 16.9， 2.9 Hz， H-3a）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 193.6 （C-4）， 166.8 （C-7）， 165.6 （C-5）， 159.0 （C-4′‍）， 131.3 （C-1′‍）， 129.9 （C-5）， 129.0 （C-2′， 6′‍）， 116.3 （C-3′， 5′‍）， 115.0 （C-10）， 111.8 （C-6）， 103.8 （C-8）， 81.1 （C-2）， 44.95 （C-3）. 数据与文献［23］一致，故鉴定化合物15为甘草素.

化合物16： 白色粉末； ESI-MS： m/z 285 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₆H₁₂O₅； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 8.28 （1H， s， H-2）， 7.96 （1H， d， J = 8.8 Hz， H-5）， 7.04 （1H， d， J = 1.6 Hz， H-2′）， 6.94 （2H， m， H-5′， 6′）， 6.93 （1H， m， H-6）， 6.85 （1H， d， J = 2.2 Hz， H-8）， 3.79 （3H， s， 4′-OCH₃）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 174.6 （C-4）， 162.8 （C-7）， 157.5 （C-9）， 153.1 （C-2）， 147.5 （C-4′‍）， 146.0 （C-3′‍）， 127.3 （C-5）， 124.7 （C-1′‍）， 123.4 （C-3）， 119.7 （C-6′）， 116.6 （C-10）， 116.5 （C-2′）， 115.3 （C-6）， 112.0 （C-5′）， 102.1 （C-8）， 55.7 （4′-OCH₃）. 数据与文献［24］一致，故鉴定化合物16为毛蕊异黄酮.

化合物17： 黄色粒状粉末； ESI-MS： m/z 449 ［M+H］⁺， 其分子式为C₂₁H₂₀O₁₁； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 8.06 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-2′， 6′）， 6.89 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-3′， 5′）， 6.41 （1H， d， J = 1.8 Hz， H-8）， 6.21 （1H， d， J = 1.8 Hz， H-6）， 5.26 （1H， d， J = 7.4 Hz， Glc-1）， 3.70 （1H， dd， J = 11.9， 2.2 Hz， Glc-6a）， 3.53 （1H， dd， J = 11.9， 5.5 Hz， Glc-6b）， 3.43 （2H， m， Glc-3， Glc-4）， 3.35 （1H， brs， Glc-2）， 3.20 （1H， ddd， J = 9.7， 5.5， 2.3 Hz， Glc-5）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 179.5 （C-4）， 166.0 （C-7）， 163.1 （C-5）， 161.6 （C-4′）， 159.1 （C-2）， 158.5 （C-9）， 135.4 （C-3）， 132.3 （C-2′， C-6′）， 122.8 （C-1′）， 116.1 （C-3′， 5′）， 105.7 （C-10）， 104.01 （Glc-1）， 99.9 （C-6）， 94.7 （C-8）， 78.4 （Glc-5）， 78.0 （Glc-3）， 75.7 （Glc-2）， 71.3 （Glc-4）， 62.6 （Glc-6）. 数据与文献［25］一致，故鉴定化合物17为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷.

化合物18： 黄色无定形粉末； ESI-MS： m/z 285 ［M-H］^-， 其分子式为C₁₅H₁₀O₆； ¹H NMR （600 MHz， CD₃OD） δ_H： 8.08 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-2′， 6′）， 6.89 （2H， d， J = 8.8 Hz， H-3′， 5′）， 6.38 （1H， d， J = 1.8 Hz， H-8）， 6.17 （1H， d， J = 1.8 Hz， H-6）； ¹³C NMR （150 MHz， CD₃OD） δ_C： 177.4 （C-4）， 165.6 （C-7）， 162.5 （C-5）， 160.6 （C-4′‍）， 158.3 （C-9）， 148.1 （C-2）， 137.2 （C-3）， 130.7 （C-2′， 6′）， 123.7 （C-1′）， 116.3 （C-3′， 5′）， 104.5 （C-10）， 99.3 （C-6）， 94.4 （C-8）. 数据与文献［26］一致，故鉴定化合物18为山奈酚.

化合物19： 黄色无定形粉末； ESI-MS： m/z 299 ［M+H］⁺， 其分子式为C₁₇H₁₄O₅； ¹H NMR （600 MHz， DMSO-d₆ ） δ_H： 7.35 （1H， d， J = 8.5 Hz， H-1）， 6.98 （1H， s， H-7）， 6.62 （1H， dd， J = 8.5， 2.5 Hz， H-2）， 6.53 （1H， s， H-10）， 6.45 （1H， d， J = 2.5 Hz， H-4）， 5.95 （1H， d， J = 0.7 Hz， O-CH₂-O）， 5.91 （1H， d， J = 0.7 Hz， O-CH₂-O）， 5.56 （1H， d， J = 7.3 Hz， H-11a）， 4.27 （1H， dd， J = 10.7， 4.3 Hz， H-6）， 3.72 （3H， s， 3-OCH₃）， 3.66 （1H， m， H-6）， 3.60 （1H， m， H-6a）； ¹³C NMR （150 MHz， DMSO-d₆ ） δ_C： 160.5 （C-3）， 156.5 （C-5）， 153.7 （C-10a）， 147.5 （C-9）， 141.1 （C-8）， 132.0 （C-1）， 118.3 （C-6b）， 112.9 （C-11b）， 108.8 （C-2）， 105.4 （C-7）， 101.3 （C-4）， 101.1 （O-CH₂-O）， 93.3 （C-10）， 77.7 （C-11a）， 65.9 （C-6）， 55.3 （3-OCH₃）， 40.1 （C-6a）. 数据与文献［27］一致，故鉴定化合物19为（-）-紫檀素.

2.2 葡萄糖摄取活性结果

在探讨维持血糖浓度稳定的关键因素时，组织和细胞的葡萄糖摄取显得尤为重要， 特别是葡萄糖摄取的增加被证实能够显著改善2型糖尿病（T2DM）中的胰岛素抵抗现象. 为了进一步探究这一机制，选择大鼠骨骼肌成肌细胞（L6细胞）作为实验模型，以筛选并评估所有分离化合物对葡萄糖摄取活性的促进作用.设立胰岛素作为阳性对照组，与对照组相比，阳性药胰岛素的促葡萄糖摄取能力最强，其提升倍数为2.67倍（图2）.化合物1-3、5-7、9-12、14、16、19在一定程度上能够提高L6细胞的葡萄糖摄取能力，促摄取活性提升倍数为0.35~1.92倍；其中含有薰衣草基侧链的二氢黄酮醇类化合物3在所有分离的化合物中活性最强，在20 μg∙mL^-1浓度下能够提升1.92倍的促葡萄糖摄取活性；具有黄酮醇骨架的化合物1和2促葡萄糖摄取活性较弱，其提升倍数分别为0.71和0.35倍；具有异黄酮骨架的化合物5-7、14、16活性略有增强，其促葡萄糖摄取活性提升倍数在0.61~0.85倍之间；具有紫檀烷型骨架的黄酮10-12和19显示出中等的促葡萄糖摄取活性，其促葡萄糖摄取活性提升倍数在0.73~0.94倍之间. 化合物4在20 μg∙mL^-1浓度下对L6肌肉细胞具有较强的细胞毒活性，化合物8、13、15显示出无活性.

3 结语

从锦鸡儿属植物鬼箭锦鸡儿中共分离并鉴定出19个化合物，化合物1-11为首次从该植物中分离得到. 本研究显示从鬼箭锦鸡儿乙醇提取物分离得到的化合物多为异黄酮、黄酮及紫檀素类化合物. 进一步对鬼箭锦鸡儿的化学成分和药理作用进行深入研究，不仅可使该植物的药用价值、生态作用得到最大程度的发挥和利用，促进其植物资源的综合开发与可持续应用，同时还可对生态环境的保护起到一定的积极作用.

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基金资助

青海省基础研究计划项目(2023-ZJ-922M)