小鼠S100A9蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达及生物学活性分析

摘要

钙结合蛋白S100A9与细胞炎症应答及肿瘤生长等密切相关，但对其生物学功能还不十分清楚.本研究构建了小鼠S100A9基因的枯草芽孢杆菌诱导表达载体，以期获得具有生物活性的S100A9蛋白并探讨其功能.采用无缝克隆将小鼠S100A9基因编码区序列克隆至pHT43载体的Pgrac启动子区，并将重组载体pHT43-S100A9转化至芽孢杆菌WB800N菌株，经IPTG诱导S100A9蛋白表达.通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型检测了重组蛋白S100A9对炎症应答的调控作用. Western Blot证实了S100A9重组蛋白分泌表达，且在0.2 mmol/L的IPTG、30℃的发酵条件下其表达水平最佳. ELISA检测表明S100A9重组蛋白分泌表达量达到了15.47 ng/mL.分别利用含有1.54、3.09、6.59 ng/mL三种不同浓度S100A9重组蛋白的发酵液上清作用于LPS诱导的RAW264.7细胞，与空载组比较，1.54 ng/mL的S100A9重组蛋白能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞促炎因子TNF-α及IL-6等的表达（P<0.05）.

关键词

S100A9蛋白 / 枯草芽孢杆菌 / 异源表达 / RAW264.7细胞 / 炎症因子