HPV18间隔序列介导真核基因以双顺反子形式表达

张煜豪, 孙小强, 鲍正好, 李雨彤, 刘佳艺, 何红鹏

doi:10.13364/j.issn.1672-6510.20230167

天津科技大学学报 ›› 2024, Vol. 39 ›› Issue (04) : 9 -14+25. DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20230167

HPV18间隔序列介导真核基因以双顺反子形式表达

张煜豪, 孙小强, 鲍正好, 李雨彤, 刘佳艺, 何红鹏

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摘要

HPV18是一种DNA病毒，其E6和E7基因可读框(ORF)相隔8个核苷酸，以双顺反子形式在宫颈癌细胞HeLa细胞中表达E6和E7蛋白。为探究此间隔序列是否在基因双顺反子表达中发挥关键作用，利用此序列构建2个双顺反子表达质粒，转染人胚胎肾细胞HEK293T细胞，检测上下游2个ORF表达水平。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示2个ORF同时转录，免疫印迹(Westernblot)结果显示2个蛋白同时表达，荧光显微镜结果进一步显示红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达。以上结果证明HPV18E6和E7基因间隔序列可在上游ORF翻译结束后重新启动下游ORF翻译。此现象在真核细胞中比较罕见，分子机制可能与核糖体重新结合有关，值得进一步探究。