莱茵衣藻小G蛋白ARL1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

陶冶; 鲍冬雪; 刘雁霞; 樊振川

doi:10.13364/j.issn.1672-6510.20230193

天津科技大学学报 ›› 2024, Vol. 39 ›› Issue (06) : 14 -20. DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20230193

莱茵衣藻小G蛋白ARL1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

陶冶, 鲍冬雪, 刘雁霞, 樊振川

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF (891K)

摘要

为研究小G蛋白ARL1在纤毛生成和纤毛信号转导过程中的作用，特制得一种特异性较强的莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)ARL1多克隆抗体。构建6×His标签的原核表达载体pET-28a(+)-arl1，并在大肠杆菌(E.coli)DH5α/C+感受态中诱导表达融合蛋白6×His-ARL1，经纯化后免疫新西兰雄性大白兔。3次免疫后取耳动脉血清，以间接ELISA法测试效价后取血。通过Protein A和抗原抗体亲和纯化后获得了灵敏度高、特异性强的ARL1抗体。通过免疫荧光和免疫印迹(Westernblot)检测，发现大量ARL1定位于细胞质、细胞基体和纤毛，为后续研究ARL1在莱茵衣藻纤毛生成和信号转导中的功能奠定了基础。