基于Split-GFP系统定量分析大肠杆菌中异源表达的类胶原蛋白Scl

色依德·斯马依; 赵晨旭; 张轶群; 刘业学; 王稳航; 李玉

doi:10.13364/j.issn.1672-6510.20240034

天津科技大学学报 ›› 2025, Vol. 40 ›› Issue (01) : 13 -19+27. DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20240034

基于Split-GFP系统定量分析大肠杆菌中异源表达的类胶原蛋白Scl

色依德·斯马依, 赵晨旭, 张轶群, 刘业学, 王稳航, 李玉

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摘要

利用大肠杆菌(Escherichiacoli)表达类胶原蛋白Scl2，并通过Split-GFP系统建立一种简便、快速且可定量检测Scl2的方法。结果表明，Scl2在大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)中成功表达，并通过His亲和标签纯化得到较高纯度的Scl2。圆二色光谱和差示扫描量热仪分析发现，Scl2的二级结构和热稳定性与动物源Ⅰ型胶原蛋白相似，并且GFP11的融合对其几乎没有影响。GFP1-10和Scl2-GFP11结合的前20 h的结合速度较高，达到最大相对荧光强度需要约70 h。当两者结合1 h时，Scl2-GFP11蛋白质量浓度与相对荧光强度之间能够形成较好的线性关系，相关系数R2为0.999 5，重复性良好。本研究利用Split-GFP系统建立了体外检测并定量分析Scl2的方法，为下一步高通量筛选研究提供了快速、简便的工具。